郭森 09級生命基地 200900140029
周二下午第五排
摘要：本次實驗包括大分子水解試驗、糖發酵試驗和imvic試驗（吲哚、甲基紅試驗）三類試驗，根據要求本實驗使用六種培養基分別對所需菌種組合進行了大約24h的培養，之後按照實驗要求進行各個試驗。最後基本上觀察到了實驗現象，了解了所用菌種鑑別的方法和原則。
關鍵詞：微生物鑑定；生理生化試驗；大分子水解試驗；糖發酵試驗；imvic試驗
前言：不同種類的微生物有著不同的代謝型別，例如對一些物質的分解能力及分解代謝的產物的不同反映出他們不同的生理特徵，這些特徵可以用來對不同種類微生物進行鑑定和分類。因此可以對微生物的不同生化反應進行試驗，以此證明微生物生理特徵的多樣性，證明微生物分類鑑別的依據。
生理生化試驗相比其他鑑別方法而言相對簡便、快捷、經濟實用，在一般的實驗室中都可以進行，因此在微生物種類的初步鑑別中被廣泛使用。
1 材料和方法
1.1材料
1.2方法
1.2.2大分子水解試驗
1.2.2.1澱粉水解試驗
（1）將固體培養基熔化後冷卻至50℃左右，無菌操作成平板；
（2）用記號筆在平板底部劃成4部分；
（3）將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌分別在不同的部分劃線接種，在平板的反面分別在4部分寫上菌名；
（4）將平板倒置在37℃恆溫箱中培養24h；
（5）觀察各種細菌的生長狀況，開啟平板蓋子，滴入少量盧戈式碘液於平板中，輕輕旋轉平板，使碘液均勻鋪滿整個平板。
1.2.2.2油脂水解試驗
（1）將熔化的固體油脂培養基冷卻至50 左右時，充分振盪，使油脂均勻分布，無菌操作倒入平板，待凝；
（2）用記號筆在平板底部劃成4部分，分別在4部分標上菌名；
（3）用無菌操作將枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌分別劃十字線接種於平板的相對應部分的中心；
（4）將平板倒置，37℃溫箱中培養24h；
2 結果與分析
圖1 乳糖發酵試驗結果圖圖2 甲基紅試驗結果圖圖3 澱粉水解試驗結果圖
圖4 葡萄糖糖發酵試驗結果圖圖5 吲哚試驗結果圖圖6 油脂水解試驗結果圖
表1 大分子水解試驗結果記錄表（+表示陽性；-表示陰性）
表2 醣類發酵試驗結果記錄表（+，+表示產酸，產氣；-，-表示不產酸，不產氣）
表3 imvic試驗結果記錄表（+表示陽性；-表示陰性）
2.2結果分析
微生物對大分子物質如澱粉、蛋白質和脂肪不能直接利用，必須依靠產生的胞外酶將大分子物質分解後，才能被微生物吸收利用。胞外酶主要為水解酶，通過水裂解大分子物質為較小化合物，使其能被運輸到細胞內。澱粉遇碘液會變藍，細菌周圍遇碘液不變藍色，說明細菌周圍澱粉被細菌分泌的澱粉水解酶水解，可以通過觀察每種菌周圍透明環的有無和大小來判斷細菌有無分解澱粉的能力及能力的強弱；脂肪水解後產生的脂肪酸可以改變培養基的ph，使ph降低，培養集中的中性紅指示劑會使培養基從淡紅色轉變為深紅色，說明細胞外存在脂肪酶。
從實驗結果中可以看出，枯草芽孢桿菌銅綠假單胞菌為澱粉水解試驗陽性，其餘三菌為澱粉水解試驗陰性；銅綠假單胞菌為油脂水解試驗陽性，其餘三菌為油脂水解陰性。
2.2.2糖發酵試驗
絕大多數的細菌都能以醣類作為碳源，但是其分解醣類物質的能力有很大的差異，有些細菌在分解醣類時可以產生有機酸和氣體，有些只產酸或氣體，或有的不產氣不產酸。可通過這些菌種的生理特徵來對其進行分類和堅定。當發酵產酸時，溴甲酚紫指示劑可由紫色轉變為黃色，若產生氣體可由德漢式小管記錄。
因此，根據實驗結果可知，大腸桿菌對葡萄糖發酵產氣產酸且產氣量接近普通變形桿菌的四倍，對乳糖發酵也產氣產酸只是產氣量少於葡萄糖發酵；普通變形桿菌對葡萄糖發酵產酸產氣，但對乳糖發酵不產氣也不產酸。
2.2.3imvic試驗
吲哚試驗是用來檢測吲哚的產生，有些細菌產生色氨酸酶，分解蛋白腖中的色氨酸，產生吲哚和丙酮酸。吲哚對二甲苯氨基酸甲醛結合，形成紅色的玫瑰吲哚。但並非所有微生物都具有分解色氨酸產生吲哚的能力，因此吲哚可以作為乙個生化檢測的指標。
由實驗結果可知，大腸桿菌吲哚反應為陽性，產氣腸桿菌為陰性。
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