王唯一精94 2009010604 同組人：劉昕汪夢婕
i 環境中微生物的監測和分離純化
一、實驗目的
1. 學習並掌握無菌操作技術原理和方法
2. 學習用稀釋塗佈法分離微生物
3. 認識微生物存在的普遍性，體會無菌操作的原理
二、實驗原理
為微生物提供適宜培養它的營養、酸鹼度、溫度和氧等條件，使其正常生長。
三、實驗材料與試劑
1、土樣10g，無菌生理鹽水
2、取液器（1000微公升 1支），培養箱，培養皿，無菌有帽試管，三角瓶，無菌塗棒，接種環，1000微公升無菌吸頭若干，記號筆，酒精燈，火柴，試管架
四、實驗步驟
（一）培養基的製備
按以下步驟製備牛肉膏蛋白腖平板培養基，每組18—20個平板
成分：牛肉膏1.5g，蛋白腖3g, 氯化鈉1.5g, 自來水300ml
制法：1. 於500ml三角瓶內加入以上成分，混合溶解。
2. 調ph至7.4~7.6
3. 加入5—6g瓊脂
4. 0.1mpa滅菌20分鐘，冷卻到60度左右，採用疊皿法把培養基倒入滅好菌的90mm培養皿中，製作無菌平板，凝固後倒置待用。
（二）周圍環境中微生物的檢測
在牛肉膏蛋白腖培養及平板上做如下實驗：
1. 取乙個培養皿，分割槽，做好標記，分別於培養基不同區內接種實驗手套、書、餐卡、手錶上的細菌（進行塗抹）
2. 取乙個培養基，分割槽，分別用未細的手指、自來水洗過的手指、洗手液洗過的手指、肥皂洗過的手指塗抹培養基
將以上培養基用報紙包好倒置於37度培養箱裡培養24小時觀察結果
（三）從土壤中分離微生物
1. 採土樣
選擇較肥沃的土壤，鏟去表層土，挖5—20cm深的土壤數十克，裝入已滅菌的牛皮紙袋，封好袋口，做好編號記錄，帶回實驗室共分離用。
2. 製備土壤稀釋液
稱取土樣1g，放入盛99ml無菌水並帶有玻璃珠的三角瓶中，置搖床**5分鐘使土壤均勻分散成為土壤懸液。用1ml的無菌吸頭從中吸取1ml土壤懸液，注入盛有99ml無菌水並帶有玻璃珠的三角瓶中，吹吸三次，**均勻，製成稀釋度為10-4的土壤溶液。逐次取1ml土壤溶液分裝到滅菌後的eppendorf管中，發給每個小組備用。
3. 塗佈
用乙隻新的無菌吸頭，由稀釋好的土壤稀釋液中吸取100微公升，較均勻地放入已寫好稀釋度的牛肉蛋白腖培養基平板上，用無菌玻璃塗棒塗佈均勻，一定要多塗幾遍，從概率角度來說，塗佈時間越長越好（1~2分鐘），使細菌均勻分布，此步是實驗成功的關鍵。
4. 培養
將牛肉蛋白腖培養基平板倒置於37度溫箱中培養24小時，統計所長出的菌落數。
5. 菌落計數
培養24小時後，取出培養平板，算出同一小組幾個平板上的菌落的平均數，換算出土樣中的菌數。
土壤中的細菌含量（個/g土壤）= 菌落平均數*10*稀釋倍數
有較大片菌苔生長時，棄用，以無大片菌苔生長的培養皿計數；若成片菌苔大小不到培養皿的一半，其餘一半分布均勻，將此一半計數*2
五、實驗結果（試驗品/菌落數）
1. 手套 27
書 4餐卡 3
手錶 22
2. 未洗的手指 34
自來水洗過的手指 33
洗手液洗過的手指 1
肥皂洗過的手指 1024
3. 土壤30，18，12（*10*稀釋倍數=細菌含量）（三個樣本）
六、實驗討論
1. 無菌操作要在酒精燈旁進行，同時不能離火焰太近；培養皿的蓋要開小一點，以免空氣中雜菌混入；操作要迅速。
2. 日常生活中吃剩的食物要盡量密封儲存，如加保鮮膜，飯前要洗手
3. 在鍋中蓋著鍋蓋可以避免空氣中雜菌的進入，且鍋內環境不適宜細菌生長，因此不易壞，而在碗中食物沒有與空氣隔絕，且開放的環境與室溫適宜細菌生長，因此易變質。
4.由於未洗的手與用自來水洗過的手上菌落數基本相當，且都遠遠小於用肥皂洗過的手上的菌落數，因此反覆洗手對滅菌並無作用。
對於實驗結果：手指的檢測結果資料相差較大，可能由於塗抹時用力不同導致接觸面積不同從而使菌落數不同，今後實驗時要注意盡量注意控制變數，在其他條件相同的情況下比較結果才更可靠。
ii 固定化酵母細胞發酵啤酒實驗與酸奶製作
一、 實驗目的
1. 了解固定化細胞技術的方法和意義
2. 了解酵母發酵產生啤酒的過程
3. 學習酸奶製作方法
4. 了解純種發酵和傳統發酵在無菌操作方面的差別
二、 實驗原理
1. 固定化技術
固定化技術就是將生物酶或細胞固定在一定的基質上。由於在制定固定化細胞時，細胞和載體不起任何反應，細胞處於最佳生理狀態；同時固定化細胞有載體作為屏障，可避免外界不利因素的影響，因此能迅速增值；增殖酵母凝集在凝膠表面形成濃厚的菌體層，因此酵母能迅速與基質接觸，從而縮短週期，提高啤酒產量。
2. 啤酒生產的過程
麥芽製造麥芽汁的製造發酵過濾滅菌
3． 常見的乳酸產品
凝固型酸奶攪拌型酸奶酸性乳飲料
酸奶功效：利於人體消化吸收，促進胃腸蠕動，乳酸機酸奶中的其他有機酸還能有效的改善腸道菌群，抑制病原菌繁殖；
降血壓、降膽固醇、增強心臟功能；
預防老年性骨質疏鬆和乳腺炎，阻礙鉛吸收，減輕化療***，提高人體的免疫功能；
護膚，護髮。
三、 實驗材料與試劑
1. 無菌滴管、無菌封口膜封好的100ml三角瓶
2. 發酵培養基：100ml 8%~10%的麥芽汁裝於250ml三角瓶中
3. 2.5%的海藻酸鈉溶液5ml，滅菌
4. 1.5%的氯化鈣50ml，滅菌
5. 0.9%的無菌生理鹽水，5ml
6. 袋裝巴氏消毒的牛奶
7. 啤酒菌種：啤酒酵母
8. 酸奶菌種：市售酸奶
四、 實驗步驟
（一） 固定化酵母細胞發酵啤酒
1. 菌體培養：將培養24小時的新鮮斜面菌種接種於三角瓶中培養
2. 細胞固定化：在預熱至35度的海藻酸鈉溶液中加入2ml預熱至35度的酵母培養液，混合均勻，以無菌滴管緩慢而穩定的滴入氯化鈣溶液中，即可得到直徑約3mm左右的凝膠珠。
注意無菌操作。鈣化30分鐘左右。
3. 固定化細胞發酵啤酒：在無菌玻璃棒幫助下倒掉氯化鈣溶液，將生理鹽水倒入制得的固定化好的酵母細胞的瓶子中，洗一次凝膠珠，倒掉生理鹽水。
將100ml發酵培養基倒入制得的固定化小球的瓶子裡，用無菌封口膜封號瓶口。20~28度靜置培養48小時，注意無菌操作。
4. 放置在4度冰箱中24小時後，品嚐啤酒
（二） 製作酸奶
1. 取1000ml鮮奶攪拌煮沸消毒，加白糖60克攪拌溶解，乘熱分裝到乾淨無菌的100ml三角瓶中，用無菌封口膜封號瓶口。讓其自然冷卻。
用潔淨的封口膜將三角瓶口蓋住。冷卻至40度時，取市面上未經滅菌的原味酸奶按5%比例倒入溶解好糖的牛奶中，搖勻。
2. 或把市售經巴氏消毒的奶分裝到乾淨無菌的100ml三角瓶中，加入6%白糖，搖晃溶解，取市面上銷售的未經過滅菌的原味酸奶按5%比例倒入溶解好糖的牛奶中，搖勻。（三角瓶可用一次性紙杯代替，封口膜可用白紙代替）
3. 42度下，三角瓶（紙杯）靜置發酵培養6~8小時（如用紙杯盛牛奶，白紙封口，由於傳熱慢，需發酵10~12小時）。牛奶變為不流動的酸奶時，停止發酵。
4. 置於4度冰箱中24小時以上，待冷卻老熟後便得到酸奶。這樣製備的酸奶在4度冰箱中儲存，保質期可達5~7天
五、 實驗討論
1. 我們釀製的啤酒氣味純正，酸奶味道鮮美，對結果很滿意。
2. 固定化細胞技術的意義在於通過使載體作為屏障避免外界不利因素影響從而使微生物細胞迅速增值，導致單位體積內酵母數比通常液體培養的高，增殖出的酵母凝集形成的菌體層又使酵母能迅速與基質接觸，從而縮短週期，提高產量。
3. 沒得到凝膠柱的原因可能是他滴溶液時離液面太近（小於5cm），或滴時太急而不穩定。
微生物實驗報告
功能微生物的 篩選 培養與選育 生科院0901 21090917 2010年11月30日 概要 以產抗生素細菌的篩選和選育為目標，通過培養基製備及滅菌 菌種的分離純化 菌種的鑑定 培養條件的優化以及誘變育 種五個實驗，學習相關的實驗技術和方法.關鍵詞 分離純化 滅菌 酶活性 誘變 一 材料與方法 1...
微生物實驗指導
實驗一微生物培養基的配製和滅菌 培養基是將微生物生長繁殖所需要的各種營養物質，用人工方法配製而成的各種營養基質。它具有微生物正常生活所需的各種養料和適宜的環境條件 1 適當組分和比例的營養物質 2 適宜的ph值 3 合適的滲透壓 4 保持無菌狀態。所以培養基是培養微生物所必需的最主要材料。培養基的配...
山大微生物實驗報告 黴菌的形態觀察
作者 喻曙光學號班級 生院2010級生命基地 生北周五第四組同組者 1 學習並掌握觀察黴菌形態的基本方法 2 了解四類常見黴菌 麴黴 毛黴 青黴 根黴 的基本形態特徵 黴菌黴菌可產生復什分枝的菌絲體，分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。黴菌菌絲體 尤其是...