抑菌實驗方案

2022-08-01 10:27:04 字數 789 閱讀 1957

實驗試劑:石膏樣小孢子菌、pbs、0.9%生理鹽水、rpmi-1640培養基

實驗器材:電子分析天平、研缽、移液槍、離心管、96孔板

一.菌懸液的配製

1.無菌條件下,取3支石膏樣小孢子菌試管斜面,加入無菌生理鹽水適量(量少一點),用接種環輕輕挑取培養基表面的絲狀培養物,倒入無菌的研缽中研磨。

2.從研缽中吸取菌液,放入離心管中,移液槍吸打混勻,15s內完成。用血細胞計數板計數,將菌懸液的濃度配製成1×104-5×104cfu/ml。

二.凝集素的配製

1.準確稱取1mg凝集素粉末,加入100ul的pbs配製成10mg/ml母液。採用96孔板,用rpmi-1640培養基(ph為6.

9~7.1)進行稀釋母液稀釋100倍(取7ul的母液加入693ul的培養基),每排1~10孔依次加入90ul的培養基和90ul的100ug/ml凝集素。

2.在1~10孔中加入20ul菌懸液,第11孔中加入180ul無菌不含藥物培養基和20ul菌懸液,作為生長對照。第12僅加入200ul無菌不含藥物培養基做陰性對照。

3.每個樣品設定三個重複。

三.培養和抑菌結果判定

1。將接種菌懸液的藥敏板置於28℃恆溫培養箱中培養,7d後取出,用酶標儀在450nm波長下測定其渾濁度,與生長對照組相比第乙個渾濁度下降50%的樣品濃度為該凝集素對菌株的mic值。

rpmi.1640培養液:取rpmi-1640 10.49,用約800ml去離子蒸餾水溶解,加入mops 34.539,葡萄糖209,混勻後用imol/lnaoh調ph為7.0(25℃)定容至1000ml。用0.22l,tm濾器濾過滅菌後4℃儲存待用。

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