微生物的抑菌圈檢測方法

抑菌圈實驗說明

抑菌圈法是衡量殺菌防霉劑效果的一種方式，主要用於測定殺菌防霉劑對細菌、黴菌、酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。通過殺菌防霉劑在瓊脂平板上的擴散能力來初步篩選更有效的殺菌防霉劑品種。

用具和材料

黴菌培養皿，無菌吸管（或針筒），圓片濾紙（直徑2cm），帶玻璃珠的無菌水，帶過濾漏斗的三角牌，鑷子，接種針（環），熔化狀態的瓊脂培養基（最好保溫於45℃左右水浴中），一定濃度的藥劑，供試驗用的菌種。試驗過程

1.用接種環挑取各試管斜面的菌種於帶玻璃珠的無菌水中，用手振盪數分鐘使孢子分散，

過濾後製成混合孢子懸液。

2.用無菌吸管（或針筒）向各培養皿中注入一定濃度的混合孢子懸浮液0.5ml。3.向各培養皿內注入15ml~20ml的熔化狀瓊脂培養基（約45℃），將菌液與培養基混合均

勻，待其冷卻。

4.用鑷子將圓片濾紙在不同濃度的防霉劑中浸漬片刻，取出置於帶菌培養基平板的**，

蓋上蓋子

5.置適宜溫度下，培養2~3d，觀察濾紙片圓片周圍抑菌圈的有無及大小。注意事項

1.所有的操作用具和材料都要事先做滅菌處理，操作必須在無菌室（或無菌箱）內於火焰

旁進行。

2.黴菌、細菌、酵母菌等各種微生物都必須分別配置混合菌液，即這裡指的混合菌液是黴

菌或酵母菌等諸種菌的分別混合液，並非黴菌、細菌和酵母菌的混合液。3.混合菌液的濃度一般為106~108cfu/ml.

4.倒入培養皿的瓊脂培養基溫度不能太高（一般為45℃左右），否則會引起微生物死亡。

也不能太低，因為瓊脂會很快凝結，以致攪拌不均勻，影響試驗結果。

5.各種微生物的最適生長溫度不同（例如黴菌一般為25~30℃，細菌一般為32~37℃等），

恆溫培養時宜分開放置。結果評判

由於濾紙圓片所吸附的藥液慢慢向四周擴散，因此在濾紙片的周圍就出現清晰的抑菌圈（加入該防霉劑對供試菌有抑制效果）。抑菌圈的大小代表藥劑抗菌力的高低。在一定的藥劑濃度範圍內，藥劑的濃度越高則抑菌圈的直徑越大。

此法同樣適合於測定單個菌的抗菌效果。