比濁法微生物的生長引起培養物混濁度的增高。通過紫外分光光度計測定一定波長下的吸光值,判斷微生物的生長狀況。對某一培養物內的菌體生長作定時跟蹤時,可採用一種特製的有側臂的三角燒瓶。
將側臂插入光電比色計的比色座孔中,即可隨時測定其生長情況,而不必取菌液.該法主要用於發酵工業菌體生長監測。
菌絲長度測量法
對於絲狀真菌和一些放線菌,可以在培養基上測定一定時間內菌絲生長的長度,或是利用乙隻一端開口並帶有刻度的細玻璃管,到入合適的培養基,臥放,在開口的一端接種微生物,一段時間後記錄其菌絲生長長度,藉此衡量絲狀微生物的生長。
微生物計數法
血球計數板法
血球計數板是一種有特別結構刻度和厚度的厚玻璃片,玻片上有四條溝和兩條嵴,**有一短橫溝和兩個平台,兩嵴的錶比兩平台的表面高0.1 mm,每個平台上刻有不同規格的格網,**0.1 mm2面積上刻有400個小方格.
通過油鏡觀察,統計一定大格內微生物的數量,即可算出1毫公升菌液中所含的菌體數.這種方法簡便,直觀,快捷,但只適宜於單細胞狀態的微生物或絲狀微生物所產生的孢子進行計數,並且所得結果是包括死細胞在內的總菌數。
染色計數法
為了彌補一些微生物在油鏡下不易觀察計數,而直接用血球計數板法又無法區分死細胞和活細胞的不足,人們發明了染色計數法.借助不同的染料對菌體進行適當的染色,可以更方便的在顯微鏡下進行活菌計數.如酵母活細胞計數可用美藍染色液,染色後在顯微鏡下觀察,活細胞為無色,而死細胞為藍色。
比例計數法
將已知顆粒(如黴菌孢子或紅細胞)濃度的液體與一待測細胞濃度的菌液按一定比例均勻混合,在顯微鏡視野中數出各自的數目,即可得未知菌液的細胞濃度。這種計數方法比較粗放.並且需要配製已知顆粒濃度的懸液做標準。
液體稀釋法
對未知菌樣做連續十倍系列稀釋,根據估計數,從最適宜的三個連續的10倍稀釋液中各取5毫公升試樣,接種1毫公升到3組共 15只裝培養液的試管中,經培養後記錄每個稀釋度出現生長的試管數,然後查最大或然數表mpn得出菌樣的含菌數,根據樣品稀釋倍數計算出活菌含量.該法常用於食品中微生物的檢測,例如飲用水和牛奶的微生物限量檢查。
平板菌落計數法
這是一種最常用的活菌計數法。將待測菌液進行梯度稀釋,取一定體積的稀釋菌液與合適的固體培養基在凝固前均勻混合,或將菌液塗佈於已凝固的固體培養基平板上。保溫培養後,用平板上出現的菌落數乘以菌液稀釋度,即可算出原菌液的含菌數。
一般以直徑9cm的平板上出現 50-500個菌落為宜.但方法比較麻煩,操作者需有熟練的技術.平板菌落計數法不僅可以得出菌液中活菌的含菌數,而且同時將菌液中的細菌進行了一次分離培養,獲得了單轉殖。
試劑紙法
在平板計數法的基礎上,發展了小型商品化產品以供快速計數用.形式有小型厚濾紙片,瓊脂片等。在濾紙和瓊脂片中吸有合適的培養基,其中加入活性指示劑2,3,5-氯化三苯基四氮唑(ttc,無色)待蘸取測試菌液後置密封包裝袋中培養。
短期培養後在濾紙上出現一定密度的玫瑰色微小菌落與標準紙色板上圖譜比較即可估算出樣品的含菌量。試劑紙法計數快捷準確,相比而言避免了平板計數法的人為操作誤差。
體積測量法(又稱測菌絲濃度法)
通過測定一定體積培養液中所含菌絲的量來反映微生物的生長狀況.方法是,取一定量的待測培養液(如10毫公升)放在有刻度的離心管中,設定一定的離心時間(如5分鐘)和轉速(如5000 rpm),離心後,倒出上清夜,測出上清夜體積為v,則菌絲濃度為(10-v)/10。菌絲濃度測定法是大規模工業發酵生產上微生物生長的乙個重要監測指標.
這種方法比較粗放,簡便,快速,但需要設定一致的處理條件,否則偏差很大,由於離心沉澱物中夾雜有一些固體營養物,結果會有一定偏差。
稱乾重法
可用離心或過濾法測定。一般乾重為濕重的10-20%。在離心法中,將一定體積待測培養液倒入離心管中,設定一定的離心時間和轉速,進行離心,並用清水離心洗滌1-5次,進行乾燥。
乾燥可用烘箱在105℃或100℃下烘乾,或採用紅外線烘乾,也可在80℃或40℃下真空乾燥,乾燥後稱重.如用過濾法,絲狀真菌可用濾紙過濾,細菌可用醋酸纖維膜等濾膜過濾,過濾後用少量水洗滌,在40℃下進行真空乾燥。稱乾重發法較為煩瑣,通常獲取的微生物產品為菌體時,常採用這種方法,如活性乾酵母，一些以微生物菌體為活性物質的飼料和肥料。
微生物生長的檢測方法
摘要 微生物的檢測，無論在理論研究還是在生產實踐中都具有重要的意義，本文分生長量測定法，微生物計數法，生理指標法和商業化快速微生物檢測簡要介紹了利用微生物重量，體積，大小，生理代謝物等指標的二十餘種常用的檢測方法，簡要介紹了這些方法的原理，應用範圍和優缺點。概述 乙個微生物細胞在合適的外界條件下，不...
微生物檢測方法和手冊
目前所有的微生物檢測和和研究都是建立在伯傑氏手冊的基礎上的。伯傑氏這個人從形態結構觀察 培養環境 生理生化代謝 生理組分和遺傳物質對微生物進行對比研究和分類。後人為了研究方便，針對每一種研究方式也發明了一些裝置。首先從形態結構觀察說起，形態結構觀察主要借助於暗視野顯微技術 相差顯微技術和染色顯示。相...
微生物的抑菌圈檢測方法
抑菌圈實驗說明 抑菌圈法是衡量殺菌防霉劑效果的一種方式，主要用於測定殺菌防霉劑對細菌 黴菌 酵母菌的抑菌作用，是定性或半定量的方法。通過殺菌防霉劑在瓊脂平板上的擴散能力來初步篩選更有效的殺菌防霉劑品種。用具和材料 黴菌培養皿，無菌吸管 或針筒 圓片濾紙 直徑2cm 帶玻璃珠的無菌水，帶過濾漏斗的三角...