動物性病原微生物的實驗室檢測常規方法簡述

2021-09-21 11:59:05 字數 1722 閱讀 6869

2.2 核酸雜交

核酸雜交技術是較早的應用於病原微生物的檢測技術,首先從樣品中提取核酸(dna或rna),將此核酸進行變性處理後固定在固相載體上,加入帶有特殊標記物的探針,利用鹼基互補原理結合並固定探針,借助探針上標記的物質可以了解到是否有探針,甚至有多少探針被固定上去,再由此推知樣品中是否含有、甚至含有多少病原微生物。根據雜交核酸的不同,又可分為southern印跡法(檢測dna)及northern印跡法(檢測rna)。此外,斑點和原位雜交也是常用病原檢測技術。

2.3 基因晶元

基因晶元技術在分子病原檢測領域顯示出了強大的生命力,主要是因為它具有微型化、集約化、標準化高通量的的特點。它的基本原理是將大量相似病原的基因保守片段的寡核苷酸分子固定於支援物上,然後與標記的樣品或其pcr產物進行雜交,通過檢測雜交訊號的強弱進而判斷樣品中靶分子的數量,特別適合數量較多的樣品的鑑別診斷,在規模化養殖生產中非常具有應用前景。

2.3 序列測定

序列測定耗時較長,但是比其它方法更為可靠,是確診的依據。測序分為全序列測定和保守區域的測定,全序列測定主要是一些核酸序列較短的病毒,但有時為了對病原進行序列分析,有的細菌、支原體、衣原體等也進行全序列測定,但耗費巨大。

3 血清學診斷

機體受致病病感染後,其免疫系統被刺激後發生免疫應答而產生特異性抗體,用已知的特異性抗原檢測患者體液中有無相應特異抗體及其效價的動態變化,可作為某些傳染病的輔助診斷。一般採取動物的血清進行試驗,故稱為血清學診斷。

3.1 elisa

又稱酶聯免疫吸附試驗,是最常用的血清學診斷方法。elisa的基礎是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記,結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性,酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。在測定時,受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。

用於病原檢驗的elisa主要有:雙抗體夾心法測抗原、雙抗原夾心法測抗體、間接法測抗體、競爭法測抗體、競爭法測抗原、捕獲包被法測抗體和abs-elisa法。

3.2 補體結合反應

補體結合試驗是在補體參與下,以綿羊紅細胞和溶血素作為指示系統的抗原抗體反應。補體無特異性,能與任何一組抗原抗體複合物結合而引起反應。如果補體與綿羊紅細胞、溶血素的複合物結合,就會出現溶血現象,如果與病原及相應抗體複合物結合,就會出現溶菌現象,而補體不單獨和抗原或抗體結合。

如果出現溶菌,是補體與待檢系統結合的結果,說明抗原抗體是相對應的,如果出現溶血,說明抗原抗體不相對應。該方法雖操作複雜但敏感性高、特異性強,能測出少量抗原和抗體,所以應用範圍也較廣。

3.3 間接免疫螢光

間接免疫螢光的原理與簡接elisa的原理相似,只是用螢光素替代酶標記抗體,主要是用來檢測組織中的病原。首先將組織製成切片,加入能與待檢病原進行反應的特異一抗,再加入螢光二抗,通過螢光顯微鏡就可以觀察病原感染情況。以前制約免疫螢光方法使用的環節是螢光顯微鏡的數量太少,但隨著螢光技術的發展,螢光顯微鏡已成為實驗室裡不可缺少的儀器。

3.4 免疫膠體金

免疫膠體金技術是近年來發展最快的一種血清學診斷技術,它具有其它檢測技術所無法比擬的簡單、快速、準確和無汙染的優點,具有非常廣闊的臨床應用前景。膠體金是由氯金酸在還原劑的作用下,聚合成為特定大小的金顆粒,弱鹼環境下帶負電荷,可與蛋白質分子的正電荷基團形成牢固的結合,由於這種結合是靜電結合,所以不影響蛋白質的生物特性。最常用的免疫膠體金主要有免疫膠體金光鏡染色法,斑點免疫金滲濾法,膠體金免疫層析法。

以上方法是動物病原微生物目前最常用的檢測方法,每種待檢樣品都要根據其疑似病原的特性選擇不同的方法,且大多數病原需要兩種甚至兩種以上的方法才可以確診,這需要在實際應用中靈活選擇。

病原微生物實驗室生物安全責任承諾書

上海市松江區衛生局 本申請人申請病原微生物實驗室備案,對於衛生行政部門告知的內容已清楚 全面了解,將認真履行告知的義務,接受衛生行政部門的監督管理,並鄭重作出如下承諾 1 本單位所報備案申請材料中所提交的所有材料是準確的 真實的 有效的。2 在實驗室病原微生物檢測工作中,自覺遵守 傳染病防治法 病原...

7二級病原微生物實驗室生物安全管理自查表

實驗室名稱 實驗室位址 實驗室工作人員數 名 實驗室面積 平方公尺 實驗室負責人 實驗室生物安全負責人 專案 檢查內容 生物安全管理組織體系和管理責任制人員培訓考核制度消毒隔離制度實驗室操作規程 實驗室實驗室安全檢查制度 生物安廢棄物管理制度 全管理檔案管理制度 制度建立情況 生物因子生物危害評估報...

微生物實驗室檢測規範

6 儀器裝置應保持清潔,一般應有儀器套罩。7 使用儀器時,應嚴格按操作規程進行,對違反操作規程的因管理不善致使儀器械損壞,要追究當事者責任。三 藥品管理 使用制度 1 依據本室檢測任務,制定各種藥品試劑採購計畫,寫清品名 單位 數量 純度 包裝規格,出廠日期等,領回後建立帳目,專人管理,每半年做出消...