組培實驗方案

2021-12-20 22:18:36 字數 2182 閱讀 1981

摘要驅蚊草又叫淨蚊香草,是將來自澳洲的天竺葵植物細胞與中國的一種含有香茅醛物質的植物細胞融合而成的,它為多年生草本植物,無花,四季不落葉。葉片自然散發出帶有香茅醛的檸檬香味的氣體,具有良好的驅避蚊蟲、淨化空氣的作用;且其對人體無任何不良影響,還可提神醒腦、緩解壓力,是一種理想的環保產品。其主莖比較柔軟,可以塑造各種盆景供觀賞,市場潛力和經濟效益良好。

驅蚊香草雖能正常開花,但種子不育,利用傳統的繁殖方式增殖係數很低,必須利用組織培養的方式進行快繁來保證短時間內生產大量組培苗,從而滿足市場的需求。

本實驗以驅蚊香草幼嫩葉片為外植體,對愈傷組織的誘導條件進行篩選研究,為驅蚊香草的快速繁殖提供一定的依據。選取生長健壯、無病蟲害的驅蚊香草植株,剪取當年幼嫩的葉片為外植體,以ms為基本培養基,通過新增不同濃度的ba和iba。對驅蚊草愈傷組織的形成,以及進行增殖和生根培養試驗,研究不同激素濃度對驅蚊草愈傷組織的形成、增殖培養和生根培養的影響,為驅蚊草的快繁篩選最佳培養基。

1材料與方法

1.1 試驗材料

盆栽驅蚊香草,取其幼嫩葉片為組織培養的外植體。

1.2 試驗方法

1.2.1 外植體的選擇及消毒滅菌

先用洗衣粉水溶液浸泡5~10 min,再用自來水沖洗30 min,在無菌條件下進行消毒處理:在70%的酒精中浸泡60 s,無菌水洗滌2次,再以10%的84消毒液消毒10 min,無菌水沖洗5次,每次3~5min,然後將葉片切成0.5 cm×0.5 cm大小的方塊,把葉片邊緣用刀片切掉後,接種到培養基中培養。

1.3.1培養基的建立

以ms為基本培養基,附加蔗糖25g/l,瓊脂7g/l,細胞**素6-ba和吲哚丁酸iba

ms基本培養基:取50ml大量元素母液,微量元素母液、鐵鹽母液、有機元素母液各5ml,放入1000ml燒杯中,稱取蔗糖25克,瓊脂7克加入850ml水。在電爐上煮沸,直至瓊脂完全融化,並定容至1公升,共2公升(不能出現黏條狀物質,煮至完全澄清)。

將煮好的培養基放在實驗台上,分別按照下表加入細胞**素,生長素,吲哚丁酸攪拌均勻,並用氫氧化鈉溶液將ph調整到5.8~6.0之間。

(生長勢表示符號 —死亡 +較差 ++較好 +++好 ++++非常好)

染菌率=(5/27)%=18.5%

採用正交設計試驗對細胞**素6-ba和吲哚丁酸iba的配比用量進行篩選,以期獲得比較好的誘導愈傷組織培養基。因素與水平設計見上表。試驗共分9個處理根據上面的**分別配9種不同激素濃度的培養基,每個處理三瓶共27瓶,以此來確定在哪一激素濃度下面對愈傷組織的誘導效果好。

1.3.2.分裝與滅菌

將配製好的培養基分裝到150ml的錐形瓶中(每個瓶子大約50ml),用封口膜包好,放入高壓滅菌鍋,同時將實驗操作所使用的培養皿(要墊上濾紙)、無菌水、剪刀、鑷子包好放入滅菌鍋進行滅菌(121℃-126℃持續20分鐘)。

1.3.3接種

將滅菌好的培養基取出後,讓其冷卻,待冷卻並凝固後放入超淨工作台。同時也將滅菌好的操作工具放入超淨工作台。開啟紫外燈,殺菌20~30分鐘。

殺菌完畢,關掉紫外燈,開啟照明燈,點燃酒精燈,將接種材料放入,並用70%酒精擦手和培養瓶,確保所有的操作過程無菌。將消毒好的幼嫩葉片作為外植體接種在培養基上,放入培養溫度24度,相對濕度60%~70%,光照強度1800~2500lx的培養箱中培養,進行愈傷組織的誘導並觀察愈傷組織的生長分化狀況。

1.3.4實驗結果與分析

圖一圖二

圖三圖四

圖一和圖二都為驅蚊草葉片誘導長出的愈傷。圖二因為生長時間比較長都長出了新鮮的小葉片。圖三為沒有加任何激素的對照組,圖中所有葉片都死亡了。圖四為染菌組的**。

結果分析:不同激素濃度對驅蚊草的組織培養有不同的影響。

1 根據所做實驗得出了:ms +6-ba 0.5mg/l+ iba 0.

2mg/l+蔗糖25 g/l+瓊脂7g/l為誘導驅蚊草愈傷組織的最佳培養基,在此條件下外植體的增殖數最多,長勢旺。

2 染菌的原因:可能對葉片的殺菌不徹底或者是在操作過程中帶入了細菌,而導致染菌。

結論:初步建立了驅蚊草的離體快繁體系,為研究驅蚊草的增殖倍數、培養基和激素的優化組合及其試管苗的移栽煉苗等方面奠定了基礎。

1. 胡本祥.張琳.楊魯.hu lu 驅蚊草的組織培養研究[期刊**]-陝西中醫學院學報2005,28(5)

2. 梁貴秋.唐燕梅.陸飛驅蚊香草的組織培養與快速繁殖[期刊**]-廣西熱帶農業 2004(5)

3. 期刊**吳林.吳飛.余家平.蔣琳.張晨晨.王鈺.wu yu 驅蚊草組織培養及其愈傷組織誘導研究[期刊**]-生物學雜誌2007,24(4)

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