榿木組培快繁體系建立實驗方案
1、利用種子形成無菌體系
目前種子滅菌後，發芽情況不甚理想，有可能是滅菌時間過長等原因造成。建議參照西大大學的無菌種子滅菌方法。
2、針對幼苗生長一段時間後，枯黃的問題。可能在如下幾個方面進行培養基的改良。
從目前的情況來看，可能與基本培養基與基本培養環境有關，與激素的關係不大。因此，我覺得應該首先使其榿木幼苗能夠在培養基中正常生長，然後再選擇不同激素進行增殖，壯苗，生根培養基的篩選。
2．1 在基本培養基方面進行改良。
有可能是ms培養基鹽離子濃度過高造成的，特別是氮元素濃度過高。因此可以採用以下幾種基本培養基進行篩選。優先考慮適合木本植物生長的wpm培養基。
第一步：實驗wpm培養基（附表）。
以ms為對照，激素均為0.5 ba+0.1 naa。
由於各個配方鹽離子濃度不同，應該做預實驗調整卡拉膠或瓊脂粉的濃度。ph值也調整到5.8。
（應考慮到高溫滅菌後ph值會降低0.2-0.8）
ms培養基（對照）
大量元素1/2 ms
大量元素1/4 ms
wpm3/4wpm
1/2wpm
第二步：實驗懷特（white）培養基
以ms，wpm為對照，激素均為0.5 ba+0.1 naa。由於各個配方鹽離子濃度不同，應該做預實驗調整卡拉膠或瓊脂粉的濃度。ph值也調整到5.8。
ms培養基（對照）
wpmwhite
3/4white
1/2white
2.2 基本培養環境進行調整
從個人經驗來看，wpm或者改良wpm可能較適合榿木組培苗的生長。如果篩選出較適宜的基本培養基可以在如下幾個方面進行進一步優化。
ph值方面
培養基軟硬程度方面
加活性炭
其它3 增殖培養基的篩選
首先應該保證得到較為適宜的基本培養基，在此基礎上進行增殖培養基的篩選。增殖係數是衡量快繁體系成功與否的關鍵因素之一。除此之外，考慮到未來應用於工廠化育苗，高效低成本是關鍵。
因此，在篩選培養基的時候應該優先考慮**較低的細胞**素，如ba。其次在增殖方式上，優先考慮不經過愈傷組織直接誘導不定芽的方式，這樣可以大大節省培養時間和效率。增殖培養基的篩選關鍵在於細胞**素和生長素的比例關係，如ba和naa。
細胞**素絕度濃度不宜太高，否則會造成玻璃化以及後續生根困難的問題。如果ba始終不能誘導生根，可以考慮kt或者tdz。從個人經驗來看，tdz能快速誘導出大量的不定芽，但是tdz有抑制生長和生根的作用。
所以雖然可能解決增殖的問題，但是在後續壯苗或者生根的難度可能較大。
備註：聽蔡老師介紹，林科院目前用瓊脂做培養基，是否可以換成卡拉膠更經濟，有利於後續工廠化生產。在篩選培養基的時候，使用的各類激素應該保證產品質量且實驗記錄詳細。
附表：wpm培養基配方
1、大量元素
注：上述為1 l 50×母液所需藥品量，逐樣溶解後加入容量瓶中，定容到1 l。
2、鈣鹽
注：上述為1 l 50×母液所需藥品量，逐樣溶解後加入容量瓶中，定容到1 l。
3、鐵鹽、有機、微量與ms相同。
4、由於離子濃度較低，應該適當增加卡拉膠或瓊脂粉的濃度。建議先少量配置做預實驗。
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