電鏡標本取材方法及要求

2022-08-20 00:57:04 字數 806 閱讀 6286

3 、瓊脂預包埋法:有些游離細胞離心後容易散開,可用此法處理。首先將細胞、細菌、病毒等用生理鹽水製成懸液,然後離心成團( 2000 轉 / 每分鐘, 10—20 分鐘),去上清夜,加 2.

5% 戊二醛固定液預固定 1 小時以上,再離心,去上清夜,加磷酸緩衝液或生理鹽水漂洗,再離心,如此迴圈操作 2 次備用。其次配製好 2% 瓊脂水溶液,加熱完全溶解後,保持在 50c ~ 55c 之間;再將上述離心物在水浴中加熱至 50 ℃ 。第三,用熱吸管吸取熱瓊脂加入到細胞團中,攪拌均勻,立即離心 5 分鐘( 4000 轉 / 每分鐘,)。

最後,待瓊脂凝固後取出,修成約 1mm x 1mm x 1mm 大小放入 2.5% 戊二醛固定液中靜置於 4 ℃ 冰箱備用。

二取材要求

電鏡生物樣品製備的關鍵在於製出的樣品必須忠實地反映其生活時的狀態,盡量避免「死後改變」和人為假象的發生,因此,取材這一步非常重要。取材要求如下:

1 、冷:取材的器械和固定液均應事先在 4 ℃ 冰箱內預冷。

2 、快:取材時動作要快,所用的刀片要鋒利,一般要求在臟器離體後 1 ~ 2 分鐘內取材完畢並放入 2.5% 戊二醛固定液內於 4 ℃ 冰箱內儲存。

另外,應避免對組織的擠壓和人為損傷。

3 、小:為了能讓組織充分固定,必須把組織切成盡可能小的塊,一般要求組織塊在 1 立方公釐左右或橫切面為 1 平方公釐的長條形 , 而**、肌腱等組織較緻密,取材應在 1 立方公釐以內。

4 、準:由於電鏡標本要求小塊取材,為了電鏡觀察的準確性,取材部位必須要準確,而且,不同實驗組的標本盡量取在相同部位(如心肌組織取左心室,則一律取左心室),否則,將無法比較,進而影響觀察結果,最終導致電鏡觀察失敗。

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木工驗收要求及方法

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