1.方法原理
(1)流動相利用毛細管力帶著樣品穿過固定相。
(2) 樣品與固定相的相互作用是指組份在移行過程中由於偶極 - （誘導） - 偶極相互作用，
氫鍵和范德華力的作用而產生不同程度的延緩、吸附、分散、離子交換和絡合等分離機理。
2.溶劑
使用的溶劑必須是「分析純」或「色譜純」，溶劑組成採用體積量比（如正丁醇 - 冰乙酸 - 水= 4：1：1，v/v/v），或者絕對量（如18ml 甲苯 + 2 ml 甲醇）。
其總量應足以使tlc/hptlc 板的浸入深度約為5mm。展開劑要求新鮮配製，不要多次反覆使用,如需分層，則按要求放置分層後取需要的一相（上層或下層），備用。
一、溶劑選擇規則：
1、 考慮分離成分的極性、溶解度、吸附度。
2、 先加入極性較小的溶劑，若不容再加入少量極性大的溶劑
3、 一般根據相似相溶原則，需要注意，極性相差大的不混溶。
4、 混合溶劑通常使用乙個高極性和低階性溶劑組成的混合溶劑。
5、 展開劑的比例要靠嘗試.一般根據文獻中報道的該類化合物用什麼樣的展開劑，就首先嘗試使用該類展開劑，然後不斷嘗試比例，直到找到乙個分離效果好的展開劑。
6、 一般把兩種溶劑混合時,採用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分開的跡象,再調整比例（或者加入第三種溶劑）,達到最佳效果；如果沒有分開的跡象（斑點較「拖」），最好是換溶劑。
二、展開劑的選擇條件：
1 對的所需成分有良好的溶解性可使成分間分開；
2 待測組分的rf在0.2~0.8之間，定量測定在0.3～0.5之間；
3 不與待測組分或吸附劑發生化學反應； ⑤沸點適中，黏度較小；
⑥展開後組分斑點圓且集中混合溶劑最好用新鮮配製。
三、溶劑極性參數列
環已烷 :-0.2、石油醚（ⅰ類，30~60℃）、石油醚（ⅱ類，60~90℃）、正已烷:
0.0、甲苯:2.
4、二甲苯:2.5、苯:
2.7、二氯甲烷:3.
1、異丙醇:3.9、正丁醇:
3.9、四氫呋喃:4.
0、氯仿:4.1、乙醇:
4.3、乙酸乙酯:4.
4、甲醇:5.1、丙酮:
5.1、乙腈:5.
8、乙酸:6.0、水:
10.2
1、一般來說，弱極性溶劑體系的基本兩相由正己烷和水組成，再根據需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯來調節溶劑系統的極性，以達到好的分離效果，適合於生物鹼、黃酮、萜類等的分離；
2、中等極性的溶劑體系由氯仿和水基本兩相組成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調節，適合於蒽醌、香豆素，以及一些極性較大的木脂素和萜類的分離；
3、強極性溶劑，由正丁醇和水組成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等來調節，適合於極性很大的生物鹼類化合物的分離。
四、展開劑的選擇
物質分子化學結構中，通常由較極性部分和非極性部分兩部分。例如下面以苯丙烷為極性小部分，隨著極性基團部分的增加，總體的極性就增加，展開劑極性也增加了。
以下分開討論不同化合物極性情況及其對應的展開劑。
1、類極性較小的揮發性物質
冰片：石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯(17:3厚朴酚：苯－醋酸乙酯(9:1.5)、
α-香附酮：苯－醋酯乙酯－冰醋酸(92:5:5丹皮酚：環己烷－醋酸乙酯(3:1)，
結論：以石油醚、正構烷和苯為體積百分數比較大的溶劑，通常起溶解和分離化合物的作用，而用醋酸乙酯為調節rf（比移值）的溶劑。為了減少拖尾之類其他相似相溶原則以外的影響，適當加入新增劑，如有機酸或者有機鹼。
2、類極性較小的不揮發性物質
β -谷甾醇：環己烷－醋酸乙酯－甲醇(6:2.5:1)或者環己烷－丙酮(5:2)、
熊果酸：甲苯－醋酸乙酯－冰醋酸(12:4:0.5齊墩果酸：氯仿－甲醇(40:1)、
豬去氧膽酸：氯仿－乙醚－冰醋酸(2:2:1)、
大黃素：苯—醋酸乙酯—甲醇(15:2:0.2)或者苯—乙醇(8:1)、
丹參酮ⅱa：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4穿心蓮內酯：氯仿-無水乙醇(9:1)
靛玉紅、靛藍氯仿－乙醇(9:1)或者苯－氯仿－丙酮(5:4:1)
結論：這類物質展開劑極性比極性較小的揮發性物質洗脫力強一些，因為這類物質極性小的母核大，而極性大的基團通常可以形成氫鍵，比如羧酸、羥基。以上物質，母核分子量減小、母核結構中不飽和健的增加（尤其是出現苯環），極性基團的增加，都使極性增加，展開劑極性也增大。。
這個範圍內的物質很多，一般展開劑大百分數的溶劑可以從環己烷—〉甲苯—〉二甲苯—〉苯—〉氯仿的順序，按照極性要求選擇。這裡注意，異丙醇、正丁醇極性指數也比較小，在這範圍的化合物很少用，因為粘性大、展開慢，造成斑點擴散；另外，羥基的氫鍵作用力也有不利。調節rf值的溶劑，從醋酸乙酯—〉甲醇—〉丙酮—〉乙醇。
揮發性物質也有很多帶羰基、羥基的，但從它的揮發性就可以明白，分子間作用力不強，另外，母核與石油醚、正構烷和苯的結構差異小，估計更容易脫離矽膠吸附，更快進入溶劑中，而不需要通過提高展開劑的極性。
由於存在糖的多羥基結構，苷元的結構影響變小。展開劑中使用極性大的有機溶劑（氯仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇）和水。乙酸和甲酸的使用，一方面增大展開劑極性，另外也可以抑制矽膠羥基的作用，減少拖尾。
由於混溶性和矽膠耐酸能力的限制，水和酸的使用是有限度的。
3、類極性大的小分子有機酸：
沒食子酸：氯仿－醋酸乙酯－甲酸(5:4:
1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸、異綠原酸。例如下面以苯丙烷為極性小部分，隨著極性基團部分的增加，總體的極性就增加，展開劑極性也增加了。依次為肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸。
相應展開劑分別為：正己烷—乙醚—冰醋酸(5:5:
0.1)、苯－冰醋酸－甲醇(30:1:
3)、氯仿－甲醇－甲酸（9:1: 0.
5）、石油醚－乙酸乙酯－甲酸（3:6: 1）、醋酸丁酯－甲酸－水(7:
2.5:2.
5)。結論：這類物質多數是苯乙烯母核的，這個結構的極性本身比較大，另外有酚羥基和羧酸基團，個別有多羥基配基。皂苷的展開劑差不多，極性大。注意甲酸通常指的是濃度85%左右的，含有水。
4、類含氮有機物：
鹽酸小檗鹼：苯－醋酸乙酯－甲醇－異丙醇－濃氨試液(12：6：3：3：0.6)(氨蒸氣飽和)或正丁醇－冰醋酸-水(7:1:2)、
麻黃鹼：氯仿－甲醇－濃氨試液(20:5:0.5)或正丁醇－冰醋酸－水(8:2:1)
甘草酸銨：醋酸乙酯－甲酸－冰醋酸－水(15:1:1:2)。
結論分析：由於nh2矽醇基的作用很強，在強極性展開劑加有機酸、有機鹼掃尾。對於極性化合物，使用正丁醇對斑點擴散影響較小，因為化合物和矽膠的作用強。
當被分離物質為弱極性物質，一般選用弱極性溶劑為洗脫劑；被分離物質為強極性成分，則須選用極性溶劑為洗脫劑。如果對某一極性物質用吸附性較弱的吸附劑（如以矽藻土或滑石粉代替矽膠），則洗脫劑的極性亦須相應降低。
的通用顯色方法小木蟲學術部落格_g2?_o_\5x_x
理想的顯色希望靈敏度高，斑點顏色穩定、斑點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的深度與物質的量成正比，在樣品組成並不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要，通用顯色方法主要有：
_\ e/m t2k_g_v"p fg4244131、紫外照射法：方便、不破壞樣品；
_p_l o;e_r"mz_s_? d t$v4244132、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結合靈敏度高於該兩法單獨使用；
$b8m"}_?(p [+e4244133、螢光試劑：製造螢光背景，使原來紫外下無螢光物質被鑑別，有螢光物質更明顯；小木蟲學術部落格_jm0d6{_r_f;r
4、硫酸溶劑：對絕大多數有機物有效，但有破壞性。
4.薄層層析和紙色譜操作注意事項
1、點樣點樣器點樣於薄層板上,一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大於2mm,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。
若因樣品溶液太稀，可重複點樣，但應待前次點樣的溶劑揮發後方可重新點樣，以防樣點過大，造成拖尾、擴散等現象，而影響分離效果。點樣時必須注意勿損傷薄層表面
2、展開將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點5mm為宜，密封，待展開至規定距離（一般為8～15cm），取出薄層板，晾乾，待檢測。
注：展開缸如需預先用展開劑預平衡，可在缸中加入適量的展開劑，密閉，一般保持15－30分鐘。
3、顯色與檢視供試品含有可見光下有顏色的成分可直接在日光下檢視，也可用噴霧法或浸漬法以適宜的顯色劑顯色，或加熱顯色，在日光下檢視。有螢光的物質或遇某些試劑可激發螢光的物質可在356nm紫外光燈下觀察螢光色譜。對於可見光下無色，但在紫外光下有吸收的成分可用帶有螢光劑的矽膠板（如gf254板），在254nm紫外光燈下觀察螢光板麵上的螢光猝滅物質形成的色譜。
把我的祖傳秘方告訴你吧
pe(60-90)etac/pe=1:2 etac/pe/acoh=15:5:1 etac/acoh/n-butanol/h2o=2:1:1:1
8年來我用這四種體系,沒有出現過什麼問題.我一直在用的是乙酸乙酯：環已烷，不斷調節比例，直到有滿意的rf值，有拖尾時可能要加酸或鹼，我一般乙酸和三乙胺。
我用了好幾年了，都還好。不妨一試！
鋪板鋪板用的勻漿不宜過稠或過稀：過稠，板容易出現拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發後，板表面較粗糙。勻漿配比一般是矽膠g:
水=1：2～3，矽膠g:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:
2。研磨勻漿的時間，根據經驗來定，與空氣濕度有關，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板塗層的厚度，進一步影響上樣量。
塗層薄，點樣易過載；塗層厚，顯色不那麼明顯。通常，板的質量對薄層鑑別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配製和展開系統的飽和。
點樣盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微公升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。
樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹乾或放入乾燥器裡晾乾。
展開劑配製
選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配製展開劑。混合不均勻和沒有分液的展開劑，會造成層析的完全失敗。
各組成溶劑的比例準確度對不同的分析任務有不同的要求，盡量達到實驗室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑，應使用1ml的單標移液管，移液管應符合計量認證要求，儘管多數時候這不是必須的。展開系統的飽和一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。
把待展開的板放入兩槽間的平台，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，並使薄層板吸附蒸氣達到飽和，防止邊沿效應，飽和時間在半個小時左右。展開時難免要開啟蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當然動作應該盡量輕、快。
溫濕度的控制
溫濕度對薄層影響都很大。不凍結的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計主要是影響薄層板的吸附能力，導致選擇性（容量因子）的變化，濕度應根據實際情況確定。
溫度控制使用空調器或冰櫃，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應濃度的硫酸。
顯色噴顯色劑顯色最重要是有好的霧化器。
薄層色譜方法總結
1.方法原理 1 流動相利用毛細管力帶著樣品穿過固定相。2 樣品與固定相的相互作用是指組份在移行過程中由於偶極 誘導 偶極相互作用，氫鍵和范德華力的作用而產生不同程度的延緩 吸附 分散 離子交換和絡合等分離機理。2.溶劑 使用的溶劑必須是 分析純 或 色譜純 溶劑組成採用體積量比 如正丁醇 冰乙酸 ...
薄層色譜實用知識
1 怎樣提高點樣效率？點樣是造成tlc定量誤差的主要 實驗證明 定量毛細管更適合較小體積的點樣 微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡 溶液回爬現象的影響較大。為避免不同定量毛細管理體制的佔樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應注意更換樣品時，應將毛細管用超聲波...
薄層色譜法實踐技巧大總結
目的 1.藥典 薄層色譜法系將供試品溶液點於薄層板上，在展開容器內用展開劑展開，使供試品所含成分分離，所得色譜圖與事宜的對照物按同法所得的色譜圖對比，並可用薄層掃瞄器進行掃瞄，用於鑑別 檢查或含量測定。2.如果你是做鑑別的話，薄層的系統適用性主要是做檢測限和分離度 3.如果你是做含量測定，比如說用薄...