薄層色譜實用知識

2022-06-16 05:00:06 字數 977 閱讀 3527

1、怎樣提高點樣效率? 點樣是造成tlc定量誤差的主要**。

實驗證明:定量毛細管更適合較小體積的點樣;微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現象的影響較大。

為避免不同定量毛細管理體制的佔樣誤差,建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應注意更換樣品時,應將毛細管用超聲波或不同極性溶課劑清洗乾淨。在製備樣品時,溶樣溶劑黏度不能過高,以便於點樣;溶劑沸點過低則進樣體積易變,過高則會改變展開劑組成;對樣品溶解度過高會使樣點發生空心現象,常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。

經典tlc樣點原點一般為直徑3mm點間距離1-2cm底邊距離1.5cm;hplc樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm底邊距1cm.

2、展開劑的選擇

tlc與hplc相比,乙個突出的優點就是流動相的選擇具有更大的靈活性,流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的rf值位於0.1-0.7之間並達到較好的分離,與此對應的是流動相要有適當的強度和組成。

流動相強度越大,溶質rf值越大,但很可能降低分離能力;另外單一溶劑很難分離較複雜的混合物、根據相似相溶原理,要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下:根據分離樣品性質、薄層色譜板性質選擇乙個二元溶劑體系,通過調節溶劑比例以尋求適合rf值,適合的rf值找到後,再尋求極性引數相同的二元溶劑體系兩個,以這三個組成為三點組成乙個三角形,則可看到:

三角形頂點是二元體系,邊是三元體系,三角形內是四元體系,並且極性一致,可根據幾何原理得出任一點組成,這種方法較為直觀,也較簡單。

3、tlc的通用顯色方法

理想的顯色希望靈敏度高,斑點顏色穩定、斑點與背景間的對比度好,斑點的大小及顏色的深度與物質的量成正比,在樣品組成並不完全已知的情況下,通用顯色方法顯得尤為重要,通用顯色方法主要有:

1、紫外照射法:方便、不破壞樣品;

2、碘蒸氣法:通用性強,與紫外法結合靈敏度高於該兩法單獨使用;

3、螢光試劑:製造螢光背景,使原來紫外下無螢光物質被鑑別,有螢光物質更明顯;

4、硫酸溶劑:對絕大多數有機物有效,但有破壞性。

薄層色譜總結

1.方法原理 1 流動相利用毛細管力帶著樣品穿過固定相。2 樣品與固定相的相互作用是指組份在移行過程中由於偶極 誘導 偶極相互作用,氫鍵和范德華力的作用而產生不同程度的延緩 吸附 分散 離子交換和絡合等分離機理。2.溶劑 使用的溶劑必須是 分析純 或 色譜純 溶劑組成採用體積量比 如正丁醇 冰乙酸 ...

薄層色譜方法總結

1.方法原理 1 流動相利用毛細管力帶著樣品穿過固定相。2 樣品與固定相的相互作用是指組份在移行過程中由於偶極 誘導 偶極相互作用,氫鍵和范德華力的作用而產生不同程度的延緩 吸附 分散 離子交換和絡合等分離機理。2.溶劑 使用的溶劑必須是 分析純 或 色譜純 溶劑組成採用體積量比 如正丁醇 冰乙酸 ...

薄層色譜法實驗報告

瀋陽化工大學 學生實驗報告 一 實驗目的 掌握薄層色譜的基本原理及其在有機物分離中的應用。二 實驗原理 有機混合物中各組分對吸附劑的吸附能力不同,當展開劑流經吸附劑時,有機物各組分會發生無數次吸附和解吸過程,吸附力弱的組分隨流動相迅速向前,而吸附力弱的組分則滯後,由於各組分不同的移動速度而使得她們得...