電轉法設計方案一：
感受態製備：
1. 挑一環酵母菌接種於5ml yepd培養基中，30℃、250-300rpm培養過夜；
2. 取1ml一級種子分別接種於兩瓶50ml yepd培養基中，30℃、250-300rpm培養約16-18h(od:1.3-1.5)；
3. 於4℃離心收集菌體，用25ml冰無菌水洗滌一次後，細胞用10ml冰無菌水重懸，可換成較小的離心管；
4. 加入1ml，ph7.5，10×te緩衝液，搖晃均勻，再加入1ml 10×liac，旋轉搖勻，於30度輕輕搖動45min；
5. 再加入0.4ml 1 mol/l dtt，並同時旋轉搖動，於30度輕輕搖動15min；
6. 於4℃離心，棄上清（用槍吸），再用25ml冰無菌水洗滌；
7. 2.5ml冰冷的1mol/l山梨醇洗滌，離心收集菌體，棄上清（用槍吸）；
8. 每管用100ul山梨醇溶解，分裝於ep管中（80ul/管），於-70℃冰箱儲存。
電轉化：
1． 向感受態細胞中加入約5～10ug（體積小於10 ul）的dna，用槍吹吸均勻，轉移至預冷的電轉杯中，靜置5min；
2． 擦乾電轉杯，電擊，電擊引數：1.5kv，25uf，200歐姆；
3． 立即加入1ml 預冷的山梨醇，轉移至ep管中，於30℃靜置1h；
4． 離心，棄上清，加入1ml yepd後，於30℃、200rpm培養2h；
5． 離心得菌體後，吸除550 ul上清液，然後按150 ul/板進行塗板。
說明：該方法可直接採用50或100ml體系的一步法，即直接挑單菌落於yepd中培養至預定菌濃，也可採用試管搖菌收集菌體製備感受態。
設計方案二：
感受態製備：
1. 挑一環酵母菌接種於5ml yepd培養基中，30℃、250-300rpm培養過夜；
2. 取1ml一級種子分別接種於兩瓶50ml yepd培養基中，30℃、250-300rpm培養約16-18h(od:1.3-1.5)；
3. 於4℃，5000rpm，5min離心收集菌體，用25ml冰無菌水洗滌後，細胞重懸於8ml處理液中（處理液配方：100 mm liac， 10 mm dtt， 0.
6 m山梨醇，10 mm tris-hcl，ph 7.5），室溫靜置30min；
4. 4℃，5000rpm，5min離心收集菌體，用1.5ml 1mol/l預冷的山梨醇洗滌三次，離心條件一樣；
5. 每管用100ul山梨醇溶解（以黃槍頭能吸取為宜，菌濃低時可適量少加入山梨醇），最後以80 ul的終體積轉移至ep管中（菌體太多可適當放棄部分），置於-70℃冰箱儲存。
電轉化：
1. 向感受態細胞中加入約3ug（體積小於10ul）的dna，用槍吹吸均勻，轉移至預冷的電轉杯中，靜置5min；
2. 擦乾電轉杯，電擊，電擊引數：2.0kv，25uf，200歐姆；
3. 立即加入1ml 預冷的山梨醇，轉移至ep管中，於30℃靜置1h；
4. 離心，棄上清，加入1ml yepd後，於30℃、200rpm培養2h；
5. 離心得菌體後，吸除550 ul上清液，然後按150 ul/板進行塗板。
說明：處理液中的dtt是在使用前加入，其它配好後於4度儲存，dtt單獨於-20度儲存，可配成100倍的貯備液。製備體系可按比例放大。
設計方案二特別適合於採用一步法製備感受態細胞
具體如下：
1. 挑一環酵母菌接種於5ml yepd培養基中或轉接於50ml yepd中，在30℃、250-300rpm 條件下培養至od=6-10（為防止菌體老化，可將50ml培養體系提早收穫細胞，取菌體時，以1ml/次，取菌兩次或三次不等，使用菌濃達到預定的od:6-10）；
2. 取1ml菌液分裝於ep管中，於4℃，12000rpm離心30s，棄上清；
3. 收集菌體，用預冰的無菌水洗滌兩次，離心條件一樣；
4. 所得菌體用1ml處理液（配方同上）於室溫下處理30min；
5. 離心，棄上清，加入1ml 1m 預冷山梨醇，離心，棄上清，重複兩次；
6. 最終用1m 預冷山梨醇溶解菌體至終體積為80 ul，於-70℃冰箱儲存；
7. 電轉方法同上。
8. 每一步的離心均30s即可，在較短的時間內製備出的感受態轉化效率特別高。
備註：od檢測均為600nm，空白參比為：yepd，高濃測定時應稀釋測定。所有無菌水與山梨醇均在冰上預冷處理；在製備感受態階段，所有離心均在4℃條件下。
醋酸鋰轉化法
方案一：
1. 挑一環酵母菌接種於5ml yepd培養基中，30℃、200rpm培養過夜；
2. 取1ml一級種子分別接種於兩瓶50ml yepd培養基中，30℃、250-300rpm培養約5h(od:0.5-0.8)；
3. 於4℃，5000rpm，5min離心收集菌體；
4. 25ml冰無菌水洗滌兩次，離心條件一樣；
5. 用1ml 0.1m liac懸浮，離心收集菌體；
6. 再用0.5ml 0.1m liac懸浮，以50 ul/管分裝於ep管中，置於冰上備用；
7. 依次向上述50 ul感受態細胞中加入50% peg3350 ：240ul、1m licl：
36ul、2mg/ml 單鏈dna：50ul、轉化dna（5-10ug）：50ul；
8. 劇烈旋渦混勻直至沉澱菌體完全分布均勻（約1min）；
9. 30℃水浴孵育30min；
10. 42℃水浴熱休克20～25min；
11. 13000rpm離心30s收集酵母菌體，重懸酵母於1ml yepd培養基，30℃搖床孵育4h；
12. 離心收集沉澱菌體，取除約800 ul上清液，然後按每100 ul/板進行漲塗板。
方案二：
1、 接種液體yepd培養基，過夜培養至1-2×107cells/ml；
2、 取1ml一級種子分別接種於兩瓶50ml yepd培養基中，30℃、250-300rpm培養約5h(od:0.5-0.8)；
3、 收集細胞，並用無菌水清洗，之後用1ml無菌水重懸，並轉移到1.5ml離心管；
4、 1ml te/liac（10×te[0.1 m tris-hci,0.01 m edta,ph 7.
5]；lo×liac[1 m liac ph 7.5）清洗細胞，然後用1×te/liac重懸至2×109 cells/ml；
5、 1.5ml離心管中取50u懸浮液，用1ug轉化片段和50ug單鏈鮭魚精dna混合；
6、 加入300ul滅菌的40%peg溶液，劇烈混勻；
7、 30度振盪培養30min；
8、 42度水浴熱擊15min；
9、 離心5s，用1ml 1×te重懸，適當稀釋後塗佈於選擇培養基。
附：電轉法方案二中的處量液配製方法：
1. a液成份：100 mm liac，0.6 m山梨醇，10 mm tris-hcl，ph 7.5；配製量：500ml。
1.1 稱取54.654g山梨醇，用適量dd無菌水溶解於500 ml容量瓶中；
1.2 事先配製1 m liac母液，再從liac母液中取50ml至1.1所述容量瓶中；
1.3 事先配好1m tris-hcl（ph 7.5），再取5ml至1.1所述容量瓶中；
1.4 用dd無菌水定量至500ml，轉移至試劑瓶中，於4℃儲存。
2. b液成份（母液）：1 m dtt 配製量：20ml。
2.1 稱取3.09g dtt，加入到50ml小燒杯內；
2.2 加入20 ml的0.01m naoac(ph5.2)，溶解後使用0.22um濾器過濾除菌；
2.3 適量分成小份後，-20℃儲存。
3. 在使用時按每50ml菌體量用8ml處理液（a+b）。以50ml菌體為例：取a 液8ml ，再取80ul 1 m dtt 於小三角瓶中混勻，備用。
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