生化大實驗感悟

2021-03-04 02:32:27 字數 1670 閱讀 6320

止,在她們的努力下各做了兩次實驗才得到符合要求的標準曲線。然而直到第二天才發現考馬斯亮藍溶液被汙染,導致蛋白的標準曲線需要重新製作,在組員們不懈努力之下,我們及時糾正了錯誤,得到需要的標準曲線。下午我們的主要工作的裝層析柱,由朱大宇、鄧俊華、張運暢負責,裝柱過程要保持柱子平衡,防止裝柱不均勻,要用膠頭滴管沿管壁恆速滴入纖維溶液,不要產生旗袍,同時控制好稀釋的pbs緩衝液流速,不要過快,由於操作的失誤致使我們的柱子裝得太滿,為後續的上樣工作帶來了困難,柱子裝好夠,調節pbs緩衝液流速,然後過夜平衡。

6月13日是任務最繁重的一天,老師和部分同學的午飯都是在實驗室吃的。主要工作的上樣,對樣品進行純化。首先取出透析袋中的酶液,進行離心,取上清液即得到原酶液,取出2ml低溫儲存。

然後將其餘原酶點進層析柱中,由於我們的柱子裝的太滿,所以只能採取極端方法,一點點的將樣品上進層析柱,無法象其他組那樣一次性將樣品全部加入,只能待樣品全部點進柱子後封閉柱口,通入pbs緩衝液連線儀器,並調節流出液流出速度為0.8ml/min,控制好流速後由張晶、趙凱月負責記錄資料(每兩分種一次)畫圖,觀察波峰變化,不知道是什麼原因導致我們

的數值比其他組要小200多(達到了-394)。理論上來說流出液應該是一些雜蛋白,但為了謹慎起見在這個過程中每隔五分鐘即對流出液做定性檢測。有可能我們測定的比較晚,在整個層析過程中我們並未觀測到有雜蛋白的流出。

等流出液為300ml時,即等6個小時左右就可以進行樣品洗脫了,將pbs換成含0.15ml/lnacl的pbs緩衝液對柱子進行洗脫,洗脫時要連線樣品收集器,並且繼續記錄資料作圖。收集時為防止記錄錯誤,將收集管標上序號,每5min收集乙個管,然後由我對流出液進行定性分析,由於我們的收集器有些問題,需要在流出管出墊上東西才能使溶液順利收集,而這樣的結果導致我們流速過快,在第三支收集管中就檢測到了蔗糖酶的存在,在第五支收集管中酶的含量最多,在全組焦急的等待中直到第二十九管中才觀測到顏色明顯變淺,這也讓我們同時松可口氣,證明我們終於要收集完畢了,最後將收集到的酶液低溫儲存起來,這時我們全體組遠也都露出了笑容,雖然不知道最終結果會怎樣,但在這一天的等待中終於得到了較好的結果,在這個過程中全體組遠密切配合,每一步都有專人負責,合理分配任務,整體協調的很好,讓我看到了團結的力量。

6月14日,可以說是實驗的最後一天,也是最關鍵的一天,我們懷著即高興又忐忑的心情走進實驗室,高興是因為實驗過後可以好好的休息下了,而忐忑是怕實驗失敗不出結果。今天的工作的點樣做凝膠電泳,所以制膠的工作非常重要,制膠用水必須是去離子水,以防止發生離子效應影響幾,將平板清洗烘乾,配完分離膠後立即灌膠,在這個過程中不能產生氣泡,當灌到大約2/3處時立即在上面封上一層去離子水,防止氧化,等膠凝固後用濾紙小心的吸去水層,然後灌入配好的濃縮膠,插入梳子,等凝固後開始點樣,每次點樣20ul。在等待電泳的過程中做好蛋白含量及酶活力測定。

之後,每位同學做個簡單的實驗總結,看到同學在台上講述自己的實驗過程讓我深受感動,來到這個學校已經三年了,這是我們第一次團隊合作,也將是最後一次。通過本次實驗,讓我看到了自身的不足,無論做什麼事一定要認真細心,不得有絲毫馬虎,也許你的一點失誤就會影響到最後的結果,也讓我認識到了團結的力量,人的潛力是無窮的,只要去努力、堅持就沒有什麼是你做不到的。雖然最後我們的電泳跑的不是很理想,但我認為實驗的結果不是最重要的,重要的是過程。

我應該感謝組員們對我的信任,推選我來當這個組長,在實驗過程中,組遠們都積極配合,服從調派聽指揮,在整個過程中我們相處的非常愉快,可以說在歡聲笑語中結束了本次大實驗,我想這次實驗將會讓我終身難忘。

最後,在此感謝一直陪伴我們的老師和學長們,你們辛苦了!

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