(一)目的要求
1．通過細菌數量的測量了解大腸桿菌的生物特徵和規律，繪製生長線。
2．複習光電比濁法測量細菌數量的方法。
(二)基本原理
大多數細菌的繁殖速率很快，在合適的條件下，一定時期的大腸桿菌細胞每20min**一次。將一定量的細菌轉入新鮮液體培養基中，在適宜的條件下培養細胞要經歷延遲期，對數期、穩定期和衰亡期四個階段。以培養時間為橫座標，以細菌數目的對數或生長速率為縱座標作圖所繪製的曲線稱為該細菌的生長曲線。
不同的細菌在相同的培養條件下其生長曲線不同，同樣的細菌在不同的培養條件下所繪製的生長曲線也不相同。測定細菌的生長曲線，了解其生長繁殖規律，這對人們根據不同的需要，有效地利用和控制細菌的生長具有重要意義。
用於測定細菌細胞數量的方法已在上述實驗作了介紹。本實驗用分光光度計(spectrophotometer)進行光電比濁測定不同培養時間細菌懸浮液的od值，繪製生長曲線。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖15-5)測定「klettunits」值的光度計。
如圖15—6所示，只要接種1支試管或1個帶測定管的三角瓶，在不同的培養時間(橫座標)取樣測定，以測得的klettunits為縱座標，便可很方便地繪製出細菌的生長曲線。如果需要，可根據公式1klettunits=od/0.002換算出所測菌懸液的od值。
(三)器材
1．菌種大腸桿菌
2．培養基lb液體培養基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩餘60ml裝入250ml的三角瓶。
3．儀器或其他用具722型分光光度計，水浴振盪搖床，無菌試管，無菌吸管等。
(四)操作步驟
1．標記
取11支無菌大試管，用記號筆分別標明培養時間，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。
2．接種
分別用5ml無菌吸管吸取2.5ml大腸桿菌過夜培養液(培養10~12h)轉入盛有50mllb液的三角瓶內，混合均勻後分別取5ml混合液放入上述標記的11支無菌大試管中。
3．培養
將已接種的試管置搖床37℃振盪培養(振盪頻率250r/min)，分別培養0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，將標有相應時間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最後一同比濁測定其光密度值。
4．比濁測定
用未接種的lb液體培養基作空白對照，選用600nm波長進行光電比濁測定。從早取出的培養液開始依次測定，對細胞密度大的培養液用lb液體培養基適當稀釋後測定，使其光密度值在0.1~0.
65之內(測定od值前，將待測定的培養液振盪，使細胞均勻分布)。
本操作步驟也可用簡便的方法代替：
1．用1ml無菌吸管取0.25ml大腸桿菌過夜培養液轉入盛有3~5mllb液的試管中、混勻後將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自製的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成乙個大的暗環境，另以1支盛有lb液但沒有接種的試管調零點，測定樣品中培養0h的od值。測定完畢後，取出試管置37℃繼續振盪培養。
2．分別在培養0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，取出培養物試管按上述方法測定od值。該方法準確度高、操作簡便。
但須注意的是使用的2支試管要很乾淨，其透光程度愈接近，測定的準確度愈高。
(五)實驗報告
1．結果
(1)將測定的od600值填入下表：
(2)繪製大腸桿菌的生長曲線
2．思考題
(1)如果用活菌計數法製作生長曲線，你認為會有什麼不同？兩者各有什麼優缺點？
(2)細菌生長繁殖所經歷的四個時期中，哪個時期其代時最短？若細胞密度為103/ml，培養4.5h後，其密度高達2×108/ml，計計算出其代時。
(3)次生代謝產物的大量積累在哪個時期？根據細菌生長繁殖的規律，採用哪些措施可使次生代謝產物積累更多？
大腸桿菌產能機制
大腸桿菌為兼性厭氧菌，其營養型別為化能異養。呼吸型別為 在有氧條件下進行有氧呼吸產能，在無氧條件下進行無氧呼吸和發酵產能。1 有氧呼吸有氧呼吸是指以分子氧作為最終電子受體的生物氧化過程。大腸桿菌可以利用葡萄糖等作為碳源和能源。葡萄糖經emp途徑分解為丙酮酸，丙酮酸再經tca迴圈徹底氧化為co2和h2...
大腸桿菌藥敏試驗簡易方法材料
近年來，隨著養雞業的迅猛發展，雞大腸桿菌病的發病率和死亡率也不斷增加，現已成為危害養雞業 特別是肉雞 最為重要的疾病之一，為細菌病之首。因此，廣大養雞戶談之色變，沒有比感染病毒病又繼發大腸桿菌病更糟糕的了。正因為如此，抗生素得到了大量廣泛的應用，又由於大腸桿菌對抗生素容易產生耐藥性，所以大腸桿菌的耐...
生長曲線的測定
衰亡期 隨著穩定期發展，細菌繁殖越來越慢，死亡菌數明顯增多。活菌數與培養時間呈反比關係，此期細菌變長腫脹或畸形衰變，甚至菌體自溶，難以辯認其形。生理代謝活動趨於停滯。故陳舊培養物上難以鑑別細菌。體內及自然界細菌的生長繁殖受機體免疫因素和環境因素的多方面影響，不會出現象培養基中那樣典型的生長曲線。掌握...