近年來，隨著養雞業的迅猛發展，雞大腸桿菌病的發病率和死亡率也不斷增加，現已成為危害養雞業（特別是肉雞）最為重要的疾病之一，為細菌病之首。因此，廣大養雞戶談之色變，沒有比感染病毒病又繼發大腸桿菌病更糟糕的了。正因為如此，抗生素得到了大量廣泛的應用，又由於大腸桿菌對抗生素容易產生耐藥性，所以大腸桿菌的耐藥性問題日益突出。
如何解決這個問題將是畜牧獸醫工作者今後工作的重點。而就目前來說，通過抗菌藥物敏感性試驗（藥敏試驗）選擇敏感藥物對雞群進行預防和**是降低大腸桿菌病發病率和死亡率的有效手段。標準的藥敏試驗（紙片擴散法）比較繁瑣，要先進行細菌培養，再進行藥敏試驗，試驗裝置要求高，基層獸醫診療機構很難做到，現介紹一種簡易藥敏試驗方法（紙片擴散法［1］）。
1試驗方法和步驟
1.1試驗裝置恆溫培養箱1臺、乾燥滅菌箱1臺、酒精燈1個、接種棒（帶接種環）1個（接種環可用回形針自製）、手術剪1把、鑷子1個、普通營養瓊脂1瓶、玻璃平皿（直徑90mm）數個、燒杯（500ml）1個、玻璃棒1個、普通電爐1臺、定性濾紙1盒、 蒸餾水適量、生理鹽水適量、小玻璃瓶（如鏈黴素瓶）數個（洗淨晾乾）、鋼筆1支、細針頭數個、高壓蒸汽滅菌鍋（可選）1個、普通天平1臺、藥勺1個、尺子1個。
1.2普通營養瓊脂平皿製備
1.2.1平皿消毒將玻璃平皿洗淨，晾乾。
用乾燥滅菌箱120℃滅菌1小時；也可用酒精燈火焰消毒，將玻璃平皿內壁靠近火焰，同時慢慢轉動平皿使之均勻受熱，待平皿內壁上水珠烤乾併發燙為止。
1.2.2瓊脂消毒營養瓊脂與蒸餾水（或生理鹽水）以3g：
100ml的比例加入燒杯（先加蒸餾水，後加營養瓊脂），用電爐加熱同時用玻璃棒攪拌，使營養瓊脂溶化均勻。如有高壓蒸汽滅菌鍋可將溶化的瓊脂液裝入生理鹽水瓶中（不超過其容量的2/3），瓶口留一通氣孔（一般用16號針頭刺入瓶蓋），將瓶站立放入鍋內，加熱至121℃保持15分鐘即可；如無高壓鍋可直接用電爐加熱至沸騰後立即將燒杯從爐上拿下來，待泡沫消了，再放到爐上，如此煮約20分鐘（煮時不斷攪拌）。
1.2.3瓊脂匯入與儲存將消毒好的瓊脂趁熱通過玻璃棒引入平皿（也可直接倒入平皿），每皿約需20～25ml瓊脂液，瓊脂厚度約3～4mm，倒完蓋上平皿，涼透放入冰箱（2～8℃）備用，一般儲存不超過1周。
1.3藥敏片製備簡易方法是將濾紙片用打孔器或剪刀剪成小圓形（直徑約6mm）或小正方形，用乾燥滅菌箱滅菌備用。將適量藥物放入小玻璃瓶中，用少量無菌蒸餾水（注射用水）溶解稀釋（液態藥物不稀釋），然後放入濾紙片並浸濕，再將小瓶中多餘的藥液瀝淨，瓶壁貼上寫有藥名及批號的標籤，然後將小瓶放入恆溫箱（37℃）烘乾備用。
1.4接種病原由於大腸桿菌在普通培養基上生長良好，且病死雞內臟大腸桿菌含菌量很高，因此可以直接用接種環蘸取病死雞內臟組織（肝、心包、氣囊等），然後均勻塗佈於瓊脂表面，但注意不要劃破瓊脂。然後在平皿底壁中心及四周用鋼筆寫上藥物名稱（一般乙個平皿做五種藥物），再用細針頭蘸取藥片貼到瓊脂上（與所寫藥名的位置對應），最後放入恆溫箱37℃培養18～20小時觀察結果。
1.5結果判定抑菌圈直徑與藥物敏感性關係見表1、表2。
表1簡易藥敏試驗結果
表2標準藥敏試驗結果［2］
2與標準方法不同點
2.1消毒方法平皿、燒杯等玻璃器皿可用酒精燈火焰消毒。
2.2瓊脂濃度瓊脂粉與蒸餾水（或生理鹽水）的比例可適當小些（3g：100ml）。
2.3平皿製作製作瓊脂平皿時，如沒有高壓蒸汽滅菌鍋，可直接將瓊脂液煮沸消毒（約20分鐘），煮沸不能使瓊脂液完全無菌（細菌芽孢仍可存活），但因所塗病變組織含菌量高，增殖快，即使平皿上有少量細菌芽孢（繁殖慢）也不會影響結果。做好的平皿要檢查滅菌效果，可任選一平皿放恆溫箱培養24h，如無可見菌落生長則合格，否則應全部丟棄。
2.4病原接種因病死雞（有「三炎」病變）內臟大腸桿菌含菌量高，因此可以省略細菌培養一步，直接蘸取病死雞內臟組織均勻塗佈於瓊脂表面。
2.5藥敏片製作抗大腸桿菌藥多為複方製劑，因此使用哪個廠家的藥就應用此藥做藥敏片，藥粉可不按要求稀釋只要能溶化即可，但要保證所選藥物質量過關，藥中成分含量足，所標量即為**量。
3判定結果時抑菌圈直徑偏大原因
3.1藥物濃度由於本試驗藥敏片製作是直接將濾紙片浸入液態藥物或藥粉溶化後的溶液，藥物未按標準稀釋，濃度高，所以抑菌圈一般偏大。
3.2瓊脂濃度瓊脂製作時瓊脂液濃度比生產商推薦的濃度（4.4g：
100ml）低。目的是為了增加瓊脂的濕度，防止瓊脂表面過於乾燥不利於病料均勻的塗佈，同時由於濃度降低提高了瓊脂的透明度，有利於結果的觀察。但由於瓊脂濃度降低會加快藥物擴散因此抑菌圈直徑也會偏大。
4藥物選擇方法
4.1一般原則優先選擇抑菌圈大的，口服吸收好的藥物，其他作為備用藥品。
4.2藥物擴散性一般情況下水劑藥物抑菌圈大於粉劑，擴散性好的藥物（如水劑藥物）的抑菌圈大於擴散性差的藥物（如粘桿菌素、安普黴素等），因此有些藥物如以含粘桿菌素、安普黴素、利福黴素等為主的複方製劑在藥敏試驗中如果抑菌圈大於25mm應判為極敏，20～25mm判為高敏。
4.3其它情況藥物使用時，有些藥物的抑菌圈較大但圈內有細菌生長，說明有一部分細菌不能抑制，這時可選沒有雜菌的；如果其他藥物抑菌圈太小，可使用帶有雜菌的藥物並配合使用一種抑菌圈相對較大的藥物。
5影響藥敏試驗結果的因素藥敏試驗結果主要指抑菌圈的大小，影響抑菌圈大小的主要因素包括：培養基（營養瓊脂）的質量、濃度、厚度、ph值；藥敏片的藥物濃度、ph值；細菌接種量等。
5.1培養基培養基應選擇質量***的生產廠家，瓊脂的濃度和厚度可參照本試驗。
5.2藥敏片藥物濃度本試驗中自製藥敏片的藥物濃度近似於原藥濃度。由於基層裝置條件等限制，對商品藥按說明進行準確稀釋不易做到，容易出現誤差，同時也很麻煩並易汙染細菌。
因此可採用液態藥物不稀釋，粉狀藥物加少量蒸餾水稀釋的方法製作藥敏片，經過近幾年的臨床試驗表明本方法除了能引起抑菌圈偏大之外，未見其他明顯差別。
5.3藥敏片ph值由於自製藥敏片中藥物濃度高，酸、鹼性可能較強，ph值範圍相對較廣，多數藥物的ph值在5～8之間，可能抑制某些細菌的生長，但由於大腸桿菌的生長繁殖對環境要求不高，其生長ph值為5～8［3］，所以藥敏片的ph值對本試驗影響很小。
5.4細菌接種量本試驗接種病原採用直接蘸取塗佈的方法，省略了細菌培養和菌液培養。由於條件限制，基層部門如果進行繁瑣的培養過程，容易引起汙染造成結果不準確，同時，感染大腸桿菌的新鮮病死雞或瀕臨死亡的雞內臟大腸桿菌含量較高，如果每次蘸取內臟的次數相等且塗佈均勻，那麼每次藥敏試驗的細菌接種量可認為近似相等。
5.5其他測定磺胺類藥物時，應選用無蛋白腖瓊脂平皿，因為蛋白腖能使磺胺藥失去作用［4］。
6小結簡易藥敏試驗是在標準藥敏試驗（紙片擴散法）的基礎上，對一些步驟進行簡化、調整之後的方法，主要應用於防治雞大腸桿菌病時敏感藥物的選擇。因其具有簡單和易操作性，且臨床效果良好，故而適合技術裝置條件較薄弱的基層獸醫診療部門使用和推廣。
補充：此法僅限於粗略檢測。
（100g……200kg這是一般成品獸藥的兌水規格。
實際上做的藥敏片中的藥物濃度為100g……20kg（濃縮十倍，其它兌水規格也如此）也就是100g放入到20 000ml水即可。實際操作的時候用天平或者精密電子稱稱取1g藥品加到200ml水中溶解均勻，把做好的藥敏片放入其中，10分鐘後取出，37度以下烘乾，即可使用，如果條件允許，可以精確稱取到0.1g再加入20ml水，這樣會節省藥品。
整個操作過程注意不同藥品的藥敏片無論溶解的器皿還是拿藥敏片的鑷子，都要分開，否則會影響結果。沒有無菌水的情況下可以用2元一瓶的500ml人注射用生理鹽水代替。）
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