生長曲線的測定

2022-10-14 16:42:07 字數 2320 閱讀 3527

衰亡期:隨著穩定期發展,細菌繁殖越來越慢,死亡菌數明顯增多。活菌數與培養時間呈反比關係,此期細菌變長腫脹或畸形衰變,甚至菌體自溶,難以辯認其形。

生理代謝活動趨於停滯。故陳舊培養物上難以鑑別細菌。

體內及自然界細菌的生長繁殖受機體免疫因素和環境因素的多方面影響,不會出現象培養基中那樣典型的生長曲線。掌握細菌生長規律,可有目的地研究控制病原菌的生長,發現和培養對人類有用的細菌。

這4個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養條件的不同而有所不同。因此通過測定微生物的生長曲線,可了解個菌的生長規律,對於科研和生產都具有重要的指導意義。

測定微生物的數量有多種不同的方法,可根據要求和實驗室條件選用。本實驗用比濁法測定,由於細菌懸液的濃度與光密度(od值)成正比,因此可利用分光光度計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度,並將所測的od值與其對應的培養時間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線,此法快捷、簡單。

三.實驗裝置及材料

準備好的大腸桿菌和枯草桿菌菌液、營養肉湯培養基、紫外可見分光光度計、比色皿、恆溫搖床、培養箱、高壓蒸汽滅菌鍋、電子天平、酒精燈、電爐、接種環、試管架、錐形瓶、無菌吸管、燒杯、乳膠頭、報紙、膠塞、玻璃棒等。

四.實驗方法步驟及注意事項

實驗步驟: 配製營養肉湯培養基→營養肉湯培養基滅菌→配製大腸桿菌菌液標記→接種→培養→測定→繪製生長曲線

1.配製營養肉湯培養基:以1000ml記,牛肉膏:

3.0g、蛋白腖:10.

0g、nacl:5.0g、水:

1000ml、ph:7.4-7.

62.營養肉湯培養基滅菌:將步驟一包好的培養基置於高壓蒸汽滅菌鍋121℃滅菌15min.

3.接種:用1ml無菌移液管分別移取1ml大腸桿菌菌液和1ml的枯草桿菌菌液至錐形瓶中,並充分**均勻.

4.培養:將錐形瓶置於37℃下在恆溫搖床上培養(150r/min)。然後分別按對應時間將錐形瓶取出,待培養結束時測定od值。

5.測定:將培養的大腸菌群菌液用無菌移液管移取到比色皿中,選用600nm分光光度計上調節零點,用蒸餾水作為空白對照,並對不同時間培養液從0起依次進行測定,對濃度大的菌懸液用自來水適當稀釋後測定,使其od值大約在0.

2-0.8之間,經稀釋後測得的od值要乘於稀釋倍數,才是培養液實際的od值。

6.繪製生長曲線:對所得資料進行生長曲線的繪製,分析實驗結果。

五.實驗結果

大腸桿菌:

枯草桿菌:

六.實驗結果分析

繪製大腸桿菌生長曲線

繪製枯草桿菌生長曲線

1.隨著培養時間的增加,培養基裡的液體變得越來越混濁,所散發出來的味道也越來越濃,大腸桿菌培養瓶味道很難聞,是因為大腸桿菌增長迅速,後來數量達到頂峰,此時培養基內的營養物質已被消耗殆盡,大腸桿菌進行營養和空間的競爭,有些大腸桿菌死亡,最後數量不斷減少,直至變為0。

2.通過對大腸桿菌生長曲線的測定,了解了細菌生長的特點,是:剛開始時細菌緩慢增長,後來增長迅速,呈「j」型,最後細菌生長緩慢,數量達到頂峰,在一段時間內保持不變。

3.由實驗結果來看,兩個菌培養菌在對數期,未到衰亡期,考慮到測量的時間太短,10個小時左右,因此,未到衰亡期。

七.思考題

1.繪製大腸桿菌和枯草桿菌在兩種接種方法下的生長曲線。 (標出生長曲線中四個時期的位置和名稱)

答:繪製出了生長曲線,只觀察到了平緩期和對數期,大腸桿菌觀察到即將開始平穩期。

2.為什麼用比濁法測定的細菌生長只是表示細菌的相對生長狀況?

答:因為比色法只能判斷菌的相對密度,而沒有辦法區分活菌和死菌,因此只能表示細菌的相對生長狀況。

3.生長曲線中為什麼會出現穩定期和衰退期?在生產實踐中怎樣縮短延遲期?怎樣延長對數期及穩定期?怎樣控制衰退期?

答:培養基的營養有限,在菌的數量達到環境允許最大值時,同種菌之間競爭劇烈,故出現穩定期,隨著營養的進一步消耗,菌沒有足夠的營養,出現死亡,所以出現了衰退期。縮短延遲期,可以採用營養成分與原來相近的培養基,或者採用該種菌原來類似的生長條件與營養。

延長對數期和穩定期,恆化器可以將微生物保持在對數期進行研究,恆濁器可以使細菌連續生長。控制衰退期可以及時補充營養,分離出死菌。

4.接種時種子在什麼條件下為宜,液體種子比斜面種子為什麼優越?

答:左手持皿用拇指、食指和中指將皿蓋揭開約20-30度左右,角度越小遭空氣汙染的可能性越小,並靠近酒精燈附近操作。右手持接種環,先在酒精燈滅菌,然後取菌液,將沾菌接種環在培養基的邊緣劃原始線,而後使接種環在指力作用下作輕快的滑移動作,從培養皿的乙個邊緣滑向另乙個邊緣,滑動時用力要均勻,切勿將接種環嵌入培養基內。

主要是活化菌種,調整菌種的生理生化狀態。液體培養比固體發酵通氣效果好,利於大量菌體生長。

八.實驗反思

1.應用一台儀器和乙個比色皿測量,消除系統誤差。

2.在比色皿中加液時,稀釋時應該用槍頭吹打均勻。

大腸桿菌生長曲線的測定

一 目的要求 1 通過細菌數量的測量了解大腸桿菌的生物特徵和規律,繪製生長線。2 複習光電比濁法測量細菌數量的方法。二 基本原理 大多數細菌的繁殖速率很快,在合適的條件下,一定時期的大腸桿菌細胞每20min 一次。將一定量的細菌轉入新鮮液體培養基中,在適宜的條件下培養細胞要經歷延遲期,對數期 穩定期...

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