實驗六 生長曲線最初設計方案

2022-05-12 09:34:20 字數 1157 閱讀 2937

枯草芽孢桿菌生長曲線的測定

——最初實驗設計方案

1目的1.1了解細菌生長曲線特點及測定原理

1.2學習用比濁法測定細菌的生長曲線

2原理將少量細菌接種到一定體積的、適合的新鮮培養基中,在適宜的條件下進行培養,定時測定培養液中的菌量,以菌量的對數作縱座標,生長時間作橫座標,繪製的曲線叫生長曲線。它反映了單細胞微生物在一定環境條件下於液體培養時所表現出的群體生長規律。依據其生長速率的不同,一般可把生長曲線分為延緩期、對數期、穩定期和衰亡期。

這四個時期的長短因菌種的遺傳性、接種量和培養條件的不同而有所改變。因此通過測定微生物的生長曲線,可了解各菌的生長規律,對於科研和生產都具有重要的指導意義。

測定微生物的數量有多種不同的方法,可根據要求和實驗室條件選用。本實驗採用比濁法測定,由於細菌懸液的濃度與光密度(od值)成正比,因此可利用分光光度計測定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度,並將所測的od值與其對應的培養時間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線,此法快捷、簡便。

3材料3.1菌種

枯草芽孢桿菌

3.2培養基

肉膏蛋白腖培養基

3.3儀器和器具

721分光光度計,比色杯,恆溫搖床,無菌吸管,試管,三角瓶。

4流程種子液→標記→接種→培養→測定

5方法5.1種子液製備

取枯草芽孢桿菌斜面菌種1支,以無菌操作挑取1環菌苔,接入肉膏蛋白腖培養液中,靜止培養18h作種子培養液。

5.2標記編號

取盛有50ml無菌肉膏蛋白腖培養液的250ml三角瓶11個,分別編號為0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。

5.3接種培養

用2ml無菌吸管分別準確吸取2ml種子液加入已編號的11個三角瓶中,於37℃下振盪培養。然後分別按對應時間將三角瓶取出,立即放冰箱中貯存,待培養結束時一同測定od值。

5.4生長量測定

將未接種的肉膏蛋白腖培養基傾倒入比色杯中,選用600nm波長分光光度計上調節零點,作為空白對照,並對不同時間培養液從0h起依次進行測定,對濃度大的菌懸液用未接種的牛肉膏蛋白腖液體培養基適當稀釋後測定,使其od值在0.10.~0.

65以內,經稀釋後測得的od值要乘以稀釋倍數,才是培養液實際的od值。

6結果6.1將測定的od值填入下表:

6.2以上述**中的時間為橫座標,od600值為縱座標,繪製枯草芽孢桿菌的生長曲線。

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