二）連苯三酚自氧化法測sod
連苯三酚在鹼性條件下，能迅速自氧化，釋放出 ，生成帶色的中間產物。在自氧化過程的初始階段，黃色中間物的積累在滯後30~45s後就與時間成線性關係。中間產物在420nm處有強烈的光吸收，在有sod存在時由於它能催化生成o2與h2o2，從而阻止了中間物的積累，通過計算就可以求出sod的活力。
紫外分光光度計、ph計。
【一】連苯三酚，k2hpo43h2o，kh2po4，hcl均為分析純級；所用水為去離子水或同等純度蒸餾水。（2）連苯三酚液：用1×10-2mol/l hcl將之配成濃度5×10-2mol/l連苯三酚液。
（3）ph8.3, 5×10-2mol/lk2hpo4- kh2po4緩衝液。
4. 測定步驟
（1）酶液的製備：稱取5~10g樣品，加預先在冰箱中放置的上述k2hpo4- kh2po4緩衝液，緩衝液的量為所用樣品的10倍以上，在4℃條件下或冰浴中研磨成勻漿，四層紗布過濾，濾液經4000r/min離心20min，取上清液用於酶活測定。
（2）連苯三酚自氧化速率的測定：取4.5ml ph8.
3, 5×10-2mol/lk2hpo4- kh2po4緩衝液，在25℃水浴中保溫15min，加入10μl5×10-2mol/l連苯三酚液，迅速搖勻（空白以k2hpo4- kh2po4緩衝液代替），倒入光徑1cm的比色杯內，在420nm波長下於恆溫池中每隔30s測a值一次。計算線形範圍內每1min a的增值，此即為連苯三酚的自氧化速率，要求自氧化速率控制在0.070 od/min左右。
（3）酶活測定：測定方法與測連苯三酚自氧化速率相同，在加入連苯三酚之前，先加入待測sod酶液，緩衝液減少相應體積。計算加酶後測連苯三酚自氧化速率，按以下公式計算酶活。
5. 結果計算
樣品酶活單位表示在25℃恆溫條件下，每毫公升反應液中，每分鐘抑制鄰苯酚自氧化率達50%的酶量定義為1個酶活力單位。
【二】1、試劑
（1）ph8.2、50mmol/l tris-hcl
稱取tris 0.61g，edta-2na 0.037g，用雙蒸水溶解至80ml左右，用hcl調節ph =8.20（用ph計校正），最後定容至100ml。
（2）10mmol/l hcl
（3）50 mmol/l鄰苯三酚
稱取鄰苯三酚0.063g，用10mmol/l hcl溶液溶解，定容至10ml，避光儲存。
（4）sod樣液
2、器材
（1）恆溫水浴槽
（2）紫外分光光度計
（3）試管、刻度吸管、微量注射器
[方法和步驟]
1、鄰苯三酚自氧化速率的測定
取兩支試管按下錶加入25℃預熱過的緩衝液,然後加入預熱過的鄰苯三酚（空白管用10mmol/l hcl代替鄰苯三酚 ），迅速搖勻，立即傾入1cm比色杯中，在325nm波長處測定光吸收值，每隔30s讀數一次，測定4min內每分鐘光吸收值的變化。要求自氧化速率控制在每分鐘的光吸收值為0.07（可增減鄰苯三酚的加入量，以控制光吸收值）。
2、sod樣液的活性測定
樣品管取代自氧化管。樣品管測定時先加入預熱的待測酶液，再加鄰苯三酚。其餘步驟同鄰苯三酚自氧化速率的測定。
自動氧化
加sod
（3）計算
樣品酶活單位表示在25℃恆溫條件下，每毫公升反應液中，每分鐘抑制鄰苯酚自氧化率達50%的酶量定義為1個酶活力單位。
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