實驗七尿澱粉酶活性測定

2022-11-12 20:15:06 字數 1415 閱讀 8208

澱粉酶(amy或ams)在體內的主要作用是水解澱粉,它隨機地作用於澱粉分子內的α—1,4糖苷鍵生成葡萄糖、麥芽糖、寡糖及糊精。血清中的澱粉酶主要有胰型(p型)和唾液型(s型)及其亞型同工酶組成,p型澱粉酶主要**於胰腺,s型澱粉酶主要**於唾液腺。正常澱粉酶因分子量小,故可從腎小球濾過而由尿中排出。

【目的】

1、驗證澱粉酶的催化作用。

2、觀察澱粉及其水解產物分別與碘反應呈現的顏色變化。

【原理】血清及尿中的澱粉酶**於胰腺和唾液腺,正常血清與尿中有一定活性。winslow氏法測定尿和血清中澱粉酶活性是將試樣作等比稀釋,觀察一系列試樣在規定的37℃、30分鐘的條件下,恰好能將0.1%澱粉溶液1ml水解(指加入碘液後不再呈藍色)的酶量定為澱粉酶的乙個活性單位,乘以尿的稀釋倍數,即可得知每項ml尿液中的澱粉酶活性。

【器材】

試管(10mm×100mm)、試管架、電熱恆溫水浴箱、吸管、洗耳球、滴管。

【試劑】

1、9%nacl

2、0.3%碘液

3、0.1%澱粉溶液

【操作】

1、準備尿液(自備)。

2、取10支試管,編號,用吸管向管中加入0.9%nacl 1ml。

3、用1ml吸管(注意應用刻度到頭的)向第一管加尿液1ml,混合,再將試管中的液體吸起,然後任其流回試管,如此重複三次,以便全管混勻,並藉此沖洗吸管內壁。吸出此混合液1ml移入第二管中。

4、用同法處理第二管使之混勻,並取出1ml置於第三管中。依此類推,如此繼續稀釋至第九管後,吸出1ml混合液棄之,這樣既可獲得分別含原尿液為1/2ml,1/4ml,1/8ml,……1/512ml的不同濃度的尿稀釋液。第十管不加尿液作為對照管。

5、從第十管起依次向各管迅速準確加入0.1%澱粉液2ml,迅速搖勻(是否充分混勻往往是實驗成敗的關鍵!),置37℃水浴中,確保30分鐘。

6、取出各管後,立即向各管中加入0.3%碘液2滴,搖勻後觀察各管的顏色。

*注:各管依次出現黃到藍的色序,黃色表明無澱粉存在,淺紅色紫色表明有澱粉的水解中間產物,蘭色表明有澱粉存在。

【注意事項】

1、1-10號試管順序勿搞亂。

2、加樣速度盡量快。

【結果及計算】

應選擇無藍色管中尿稀釋倍數最大的一管來計算。假設無藍色管中尿液稀釋倍數最大的為第5管(而第六管為藍色),已知在第5管內含尿液1/32ml,既1/32ml尿液能在37℃、30分鐘水解0.1%澱粉2ml。

求出1ml尿液水解0.1%澱粉x ml。

1/32:2=1:x

x=2/1/32=2×32=64

即每ml尿液中所含澱粉酶的活性為64單位。

【參考值】(尿)8~64單位;(血清)4~32單位。

【臨床意義】

胰腺炎、腮腺炎、膽道疾病時尿澱粉酶活性增高。

【思考與分析】

通過本實驗,你可以檢驗自己使用吸管的技術是否熟練、準確。你的操作技術過關了嗎?

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