檢測纖維素酶酶活力—濾紙酶活力(fpa)
濾紙酶活力代表了纖維素酶的三種酶組分協同作用後的總酶活。
採用3，5一二硝基水楊酸法測定酶活：(簡稱dns法)
1、原理：纖維素經纖維素酶水解後生成還原糖，還原糖能將3，5一二硝基水楊酸中硝基還原成氨基，溶液變為橙色的氨基化合物，即：3一氨基一5二硝基水楊酸，在一定的還原糖濃度範圍內，橙色的深度與還原糖的濃度成正比，據此可以推算出纖維素酶的活力。
2、採用的濾紙酶活單位定義：
濾紙酶活反映了纖維素酶的3種水解酶，即內切型葡聚醣酶、外切型葡聚醣酶和β葡聚糖苷酶組成的誘導復合酶系的協同水解纖維素能力。是該菌株整個纖維素酶系的酶活力水平的綜合體現。代表了纖維素酶的三種酶組分協同作用後的總酶活。
在此濾紙酶活單位定義為：以濾紙為底物，在一定反應條件(ph4.8，50℃，恆溫lh)下， 以水解反應中，1ml纖維素酶液1min催化纖維素生成lug葡萄糖為1個濾紙酶活單位，以u表示。
3、濾紙酶活力(fpa)的測定：
1 取0．5ml適當稀釋的酶液，加入ph值為4.8，0.1mol/l的乙酸-乙酸鈉緩衝液lml或檸檬酸-檸檬酸鈉緩衝液lml；
2 再加入50±0.5mg濾紙(1cmx6cm)一條，於50℃保溫酶解反應1小時，(先預熱5分鐘)；
3 加入dns顯色液3ml(標準曲線用量是1.5ml)，放入已沸騰的水中沸水浴lomin，流水冷卻後在540nm下測吸光度；
4 同時用100℃煮沸lomin後失活的酶液做對照，扣除本底；
5 根據吸光度從葡萄糖標準曲線中查出相應的葡萄糖含量，根據生成的葡萄糖克數計算出酶活值。
濾紙酶活按下面公式計算：
x=（wxnxlooo）／（txm）
x:為濾紙酶酶活力，單位u／ml。
w： 為從葡萄糖標準曲線中查得的葡萄糖的濃度。
n： 為酶液稀釋總倍數。
t： 為反應時間。
m： 為樣品的體積。
4、葡萄糖標準曲線繪製方法
標準曲線繪製：取25ml具塞刻度試管6支，加入1.0 mg /ml的葡萄糖標準溶液0.
0、0.4、0.8、1.
2、1.6、2.0ml,加蒸餾水2.
0、1.6、1.2、0.
8、0.4、0.0ml,加dns試劑1.
5 ml，混勻後在沸水浴中加熱5分鐘，取出立即用冷水冷卻，用水定容至25 ml，搖勻，測吸光度a，以吸光度為縱座標，葡萄糖的含量為橫座標，繪製標準曲線。
5、3，5二硝基水楊酸（dns）試劑
稱取6.3克3,5-二硝基水楊酸用水溶解，加入21.0克naoh，182克酒石酸鉀鈉，加500ml水，加熱溶解後再加入5.
0克重蒸酚和5.0克亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻，定容至1000ml，存於棕色瓶中，放置7天後使用。
纖維素酶活力的測定——cmc糖化力法
1、 定義：1毫公升液體酶（或1克固體酶粉），在40℃ ph﹦4.6條件下，每分鐘水解羧甲基纖維素鈉（cmc-na），產生1.
0ug的葡萄糖，即為1個酶活單位，以u/g（u/ml）表示。
2、 原理：
cmc-na在纖維素酶的作用下,水解產生纖維寡糖、纖維二糖、葡萄糖等還原糖，還原糖能將3，5﹣二硝基水楊酸中的硝基還原成橙黃色的氨基化合物，在540nm波長下測定吸光度值a，吸光度與酶活成正比。cmc-na糖化力主要代表內切β-1.4-葡聚醣的活力。
3、 試劑：
3.1 0.1mol/lph﹦4.
6醋酸﹣醋酸鈉緩衝溶液：將49.0ml0.
2mol/l醋酸鈉溶液和51.0ml0.2mol/l醋酸溶液混合後加100ml蒸餾水。
注意：0.2mol／l醋酸鈉溶液：稱取27.22g結晶乙酸鈉（ar）定容至1000ml。
0.2mol／l醋酸溶液：稱取冰乙酸（ar）11.5ml定容至1000ml。
3.2 3，5二硝基水楊酸（dns）試劑：稱取6.
3克3,5-二硝基水楊酸用水溶解，加入21.0克naoh，182克酒石酸鉀鈉，加500ml水，加熱溶解後再加入5.0克重蒸酚和5.
0克亞硫酸鈉，攪拌溶解，冷卻，定容至1000ml，存於棕色瓶中，放置7天後使用。
3.3 葡萄糖標準溶液（1.0mg /ml）：稱取1.000克葡萄糖（ar）(105℃乾燥至恒重)用蒸餾水溶解後定容至1000ml，冰箱儲存備用。
3.4 羧甲基纖維素鈉溶液：稱2.0gcmc-na溶於200 ml蒸餾水中，加醋酸緩衝溶液100 ml,混勻後存於冰箱內備用。配後隔天使用。
4、 分析步驟：
4.1標準曲線繪製：取25ml具塞刻度試管6支，加入1.
0 mg /ml的葡萄糖標準溶液0.0、0.4、0.
8、1.2、1.6、2.
0ml,加蒸餾水2.0、1.6、1.
2、0.8、0.4、0.
0ml,加dns試劑1.5 ml，混勻後在沸水浴中加熱5分鐘，取出立即用冷水冷卻，用水定容至25 ml，搖勻，測吸光度a，以吸光度為縱座標，葡萄糖的含量為橫座標，繪製標準曲線。
4.2 待測酶液製備：準確稱取酶粉1.
0克置研缽中，加入ph4.6的醋酸緩衝溶液少量溶解，研細，將上清液小心傾入25ml刻度試管中，沉渣再加入少量緩衝液,如此搗研3-4次，最後全部移入試管中並定容至25ml，搖勻，過濾，濾液待測。
4.3 測定：取1.
5mlcmc-na溶液與0.5ml適當稀釋的酶液於25ml試管中，40℃水浴保溫30min後立即加1.5mldns顯色劑，沸水浴煮沸5min，取出立即冷卻，用水定容25ml，在540nm測吸光度as。
空白樣：先加1.5mldns試劑，後加0.
5ml待測酶液，與1.5mlcmc-na溶液，於25ml試管中，沸水浴煮沸5min，冷卻後用水定容25ml，在540nm測吸光度ack。
⊿a＝as－ack 根據⊿a從標準曲線上查得葡萄糖含量p。
5.4 計算
酶活力（u/g）=p*k*1000/0.5*30k：稀釋倍數。
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