畢業**開題報告
生物工程
產纖維素酶的海洋細菌的篩選及初步鑑定
一、選題的背景與意義
纖維素酶是一組能夠降解纖維素生成葡萄糖的酶的總稱。從酶的作用特性出發，纖維素酶可分為2大類：鹼性纖維素酶和酸性纖維素酶。
根據酶的作用方式又可分為3類：外切β-1, 4-葡聚糖苷酶(簡稱cbh)、內切β-1,4-葡聚糖苷酶(簡稱eg)和β-1, 4-葡萄糖苷酶(簡稱bg)
纖維素酶在自然界分布極為廣泛，昆蟲、軟體動物、高等植物、細菌、放線菌和真菌都能產生纖維素酶，反芻動物的瘤胃及豬大腸中也有分解纖維素的細菌存在。
纖維素酶的應用很廣泛，在食品、飼料、醫藥、紡織、洗滌劑、造紙、能源和中藥提取等領域都有廣泛的應用價值.
海洋中鹽分較高，所以海洋細菌纖維素酶一般在高鹽條件下他仍具有較高的活性，同時還具有耐高溫，耐極端ph、可以在室溫下長時間保持高活性等特性。這些特性將可以在很大程度上解決工業上的因高溫、高鹽、強酸或強等使沒失活的問題。因此，篩選和研究產纖維素酶的海洋細菌就顯得非常必要且有意義。
在現今的海洋水產養殖業中，有一些是以海帶、海藻、海草等海洋植物為主要飼料，然而以植物性為主的飼料中含有較多的纖維素、半纖維素和果膠等不易消化的和阻礙消化的物質，且植物細胞存在細胞壁，回影響動物對保內營養物質的吸收，因此在飼料中新增纖維素酶可以使海洋動物更好的吸收營養物質並且消化良好。寧波地處海邊，水產養殖業發達，海產品種類繁多，並且海洋資源廣泛，所以就更有必要也更應該篩選和研究產纖維素酶的海洋細菌。
二、研究的基本內容與擬解決的主要問題：
基本內容：
1、從實驗室已有海洋細菌資源庫中進行高產纖維素酶的菌株篩選
2、對獲得的產酶菌株進行鑑定
三、研究的方法與技術路線：
技術路線：菌株活化→平板初篩→複篩→目的菌株→鑑定
初篩：剛果紅染色法。在2216e培養基中新增0.
5%羧甲基纖維素鈉，纖維素酶能催化分解羧甲基纖維素鈉。室溫培養72h後往培養基中加入0.1%的剛果紅溶液，染色1h；棄去廢液，加入1mol/lnacl洗脫，浸泡1h。
由於剛果紅能與羧甲基纖維素鈉發生結合，無法洗脫，所以若菌落周圍出現透明圈，則說明該菌株能產纖維素酶。
複篩：3,5-二硝基水楊酸法（dns）.。將初篩得到的菌株接種到羥甲基纖維素鈉發酵培養基中培養後得到胞外和胞內的粗酶液，採用dns法用紫外可見分光光度計與540nm處測定od值，規定每分鐘產生1微克葡萄糖的酶量為乙個酶單位（u）。
u越大則說明酶活性越強，所對應的菌株也就越優良.
鑑定：16s rdna法。 對復篩得到的菌株16s rdna進行擴增，再通過測序對菌株進行鑑定.
四、研究的總體安排與進度：
2010.11-2010.12 進行文獻查閱和資料收集，完成開題報告及任務書，制定具體研究計畫和實驗方案。
2011.1-2011.2 完成2篇外文翻譯
2011.2-2011.4 正式進入實驗的操作階段
2011.4-2011.5 **撰寫、提交並答辯。
五、主要參考文獻：
[1] 高倫江，董全，唐春紅. 纖維素酶的研究進展及前景展望. 江蘇食品與發酵, 2007,35(4):14-17.
[2] 李榮傑. 纖維素酶高產菌的分離篩選與培養基優化. 畜牧與飼料科學, 2009,30（6）:9-11.
[3] 韓韞，蔡俊鵬. 產纖維素酶海洋菌株的篩選及鑑定. 現代食品科技,
2005,21(3):36-44.
[4] 孫凱，孟寧，馮琳，李師翁. 產纖維素酶菌株的篩選鑑定及產酶條件研究. 食品與科學, 2009,28(4):159-162.
[5] 吳琳，景曉輝，黃俊生. 產纖維素酶的分離刷選及酶活性測定. 安徽農業科學, 2009,37(17):7855-7857.7859.
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