細菌內毒素檢測方法

醫用輸液、輸血、注射器具細菌內毒素檢驗方法

中華人民共和國國家標準 gb/t14233.2—93 1993-03-16發布

一、定義及適用範圍

本法系列用鱟試劑與細菌內毒素產生凝集反應的機理，以判斷供試品中內毒素限量是否符合規定的一種方法。用以代替家兔法對供試品進行熱原初試。

本法僅適用於一次性使用輸液器、輸血器。其他產品可參照使用。

二、主要裝置

超淨工作台、電熱乾燥箱、恆溫水浴。

三、試劑

1、細菌內毒素國家標準品：用於仲裁鱟試劑靈敏度和試驗中陽性對照。

2、細菌內毒素工作標準品：用於標定鱟試劑靈敏度和試驗中陽性對照。

3、鱟試劑：靈敏度為0.25eu/ml，規格為0.5ml。

4、無熱原水：內毒素含量小於0.05eu/ml。

四、試驗前準備

1、器具除熱原

與試驗液接觸的所有器具均應除熱原。玻璃器具置電熱乾燥箱內250℃乾烤至少60min；塑料器具置30%雙氧水中浸泡4h，再用無熱原水沖洗後於60℃烘乾備用。

2、鱟試劑靈敏度測定

（1）試驗前應核對使用批號鱟試劑的靈敏度，應符合規定。

（2）靈敏度測定：根據標示的靈敏度範圍，將細菌內毒素工作標準品用無熱原水以1→2等比稀釋，選擇能出現陽性和陰性結果的4個連續稀釋液。取同一批號鱟試劑若干支，分別按標示量加入無熱原水溶解為鱟試劑溶解液。

取10mm×75mm試管若干支，分別加入0.1ml鱟試劑溶解液，加入內毒素稀釋液0.1ml，每一稀釋液平行操作4管，輕輕振動試管混勻內容物，封閉管口，置37±1℃恆溫水浴中保溫60±2min觀察結果。

最高濃度的4管應均為陽性，最低濃度的4管應為陰性。

五、試驗方法

1、供試品數量

同一批號至少3個單位供試品。

2、浸提介質

無熱原水。

3、供試液製備

在無菌條件下，每套輸液器內腔注入10ml，輸血器內腔注入15ml浸提介質，反覆蕩洗5次後兩端密封，置37±1℃恆溫箱中保溫2h，取出後將供試液匯集至一無熱原具塞玻璃容器內。供試液貯存應不超過2h。

4、試驗步驟

將鱟試劑和細菌內毒素工作標準品分別按標示量加入無熱原水溶解。細菌內毒素工作標準品逐次稀釋至0.5eu/ml，供作陽性對熱。

取10mm×75mm試管6支，其中供試品管2支各加入0.1ml內毒素工作標準品稀釋液，陰性對照管2支各加入0.1ml無熱原水，陽性對照管2支各加入0.

1ml內毒素工作標準品稀釋液，再逐一加入0.1ml鱟試劑溶解液。輕輕混勻試管內容物，封閉管口，垂直放入37±1℃水浴中保溫60±2min，輕輕取出，觀察結果。

5、結果判定

1、將試管緩慢倒轉180°，管內容物呈堅實凝膠者為陽性，記錄為（+），不呈凝膠狀或雖呈凝膠狀但不能保持完整者為陰性，記錄為（-）。

2、供試品2管均為（-）性時，判定產品符合本法規定，不再進行熱原試驗。

3、供試品2管均為（+）或有1管為（+）時，用無熱原水將供試液1→2等比稀釋按上述方法重試，供試品操作4管。如4管均為（-），判定產品符合本法規定，不再進行熱試驗。

4、重試供試品4管中有1管為（+）時，判定產品不符合本法規定，應進行熱原試驗，並根據試驗結果判定。

5、供試品細菌內毒素限量應不超過0.5 eu/ml。

6、陽性對照2管應均為（+），陰性對照2管應均為（-），否則試驗無效。