發光細菌檢測食品新增劑的致突變性方案三
1 材料和方法
1. 1 試驗菌株
發光菌凍乾粉,購自中國科學院南京土壤研究所
1. 2 樣品**
莧菜紅，胭脂紅，日落黃，檸檬黃，亮藍。用3 g /ml nacl溶液配製不同的濃度水平。所用nacl為分析純。
1. 3 儀器
生物毒性測試儀。
1. 4 試驗方法
1. 4. 1 發光菌的啟用
取一支裝有凍乾菌粉的安甑瓶,割開瓶口,加入2. 5 g /ml的nacl溶液0. 5ml,使發光菌啟用,在毒性測試儀上測出的初始發光單位為600～1 900mv,然後將安甑瓶放入0℃冰水浴中待用。
1. 4. 2 樣品的測試
(1)色素毒性測定。根據初步試驗的結果,以用直線內插法確定的染料抑制發光菌相對發光強度的ec50為中點,各向兩邊延伸3個濃度,共7個樣品濃度(ckc),每組均有空白對照(ck管)且平行3個重複樣進行試驗,向2ml ck管及2ml ckc管中同時加復甦發光菌液10μl(本批樣品測試用同一瓶復甦液),立即記時到秒,等反應15 m in後迅速放入儀器測試艙內,分別測定2ml測試管的發光量。
(2)色素顏色的校正。取乙個2ml測試管(直徑12mm),加3 g /mlnacl溶液2ml,將該管放進一裝有少量3 g /ml nacl溶液的5ml管(直徑20mm)中,使內外管的nacl溶液液面平齊,以此作為空白對照(ck)。另取1支2ml測試管,加3 g /ml nacl溶液2ml,放入另一裝有少量待測染料樣品液的5ml管內,使內外管的nacl溶液液面平齊,以此作為測試管(ckc)。
每種待測液及空白液各取3份平行樣,於ck及ckc管的內管中同時加復甦發光菌液10μl(本批樣品測試用同一瓶復甦液),立即記時到秒,等反應15m in後迅速放入儀器測試艙內,測定2只帶有內管的5 ml測試管的發光量,分別計下l1(ck)和l2(ckc)。
(3)試驗結果較正。按(1)所述方法測試帶色樣品管(ckc管)及其對照樣(ck管)的發光量,所有ck管測得之發光量均須減去較正值δl=l1-l2後才能作為ck發光量。
1. 5 資料處理
因各個安甑瓶中凍乾粉發光菌的總數和活性不盡相同,不同的安甑瓶10μl發光菌液加入同一濃度色素後所產生的發光讀數有一定差別,為了更好地比較發光強度受色素影響的程度,本研究對資料進行了處理,採用了相對發光強度:相對發光強度=試樣發光強度/對照樣發光強度。
1. 6 色素毒性的表示
色素毒性的大小表示為ec50,是引起發光菌50%相對發光強度的樣品濃度。
2 結果與分析
2. 1 發光菌的發光強度隨時間的變化趨勢發光菌被啟用之後,其發光強度會隨時間的延長而改變,實際分析時,必須選擇發光變化率較小的時刻來測試。黨亞愛研究的發光菌被啟用15m in左右,發光強度變化趨與平緩,因此,應選15m in為試樣加菌到測量發光強度的時間間隔。
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