圖1 凝膠法鱟試劑與內毒素反應的機理（略）
2 影響細菌內毒素檢查的因素
2.1 檢品的干擾ph值、離子濃度以及某些干擾成分，都會影響到檢查結果的準確性，得到所謂「假陽性」或「假陰性」結果。只有證實檢品對凝集反應無干擾之後，檢查的結果才是可信的。
判斷檢品是否有干擾要做檢品的干擾實驗。
2.2 鱟試劑的非特異性內毒素不是唯一能啟用鱟試劑凝集系統的物質，還有其他物質可以通過g因子這個「旁路」啟用鱟試劑的凝集系統。因此鱟試劑並不是專一對內毒素反應的試劑。
由旁路反應產生的陽性結果稱細菌內毒素檢查的「假陽性」。
3 特殊值的確定
3.1 藥品的內毒素限值（l）藥品細菌內毒素檢查是一種限度實驗，首先必須確定供試品的細菌內毒素限值。當供試品含內毒素低於這個限值時，按規定給藥途徑用藥，就不會引起致熱原反應；相反就有可能引起熱原反應［1］。
藥品細菌內毒素限值確定的方法有3種。
3.1.1 藥典給出藥典規定細菌內毒素檢查的品種，在藥典正文可以查到相應的l值。
《中國藥典》2023年版規定了12種注射劑的l值，2023年版規定了47種注射劑的l值，uspxxⅲ規定了471種注射劑的l值。
3.1.2 根據熱原檢查的兔劑量計算l=k/m，m規定的給藥途徑，藥品的家兔注射劑量，以ml/kg，mg/kg，μ/kg等表示；k為規定的給藥途徑；臨床無任何不良反應的內毒素閾值，以eu/kg表示。
靜脈（包括im，ip，sc，ia）：5.0 eu/kg；放射性藥品：
2.5 eu/kg；鞘內：0.
2 eu/kg。
3.1.3 根據人的最大注射劑量計算l=kw/m，m為規定的給藥途徑，人的最大注射劑量同樣以ml/kg，mg/kg，μ/kg等表示；w為人的平均體重，中國**按60 kg計算。
3.2 藥品的最大有效稀釋（mvd）做藥品的細菌內毒素檢查時，當品種的l值與所選用的鱟試劑靈敏度（λ）相等時，若經干擾實驗證實無干擾，可以直接檢查。但許多藥品的l值往往大於鱟試劑的靈敏度（l＞λ），在這種情況下，若直接檢查，得到陽性結果並不能說明該藥品的內毒素含量超過限值。
因此，當l＞λ，需要對檢品作適當的稀釋，但稀釋的倍數不能超過乙個有效的限度，這就是「最大有效稀釋」，用mvd表示。其計算公式如下：mvd=l/λ。
4 重要的實驗――預實驗
4.1 鱟試劑標示靈敏度的複核實驗鱟試劑是一種有生物活性的試劑，其穩定性受多種因素的影響，藥品的細菌內毒素檢查又是關係到藥品安全性的重要檢查項。因此各國的細菌內毒素檢查法都規定：
每批鱟試劑在用於細菌內毒素檢查前都必須對該批試劑標示的靈敏度進行複核。當複核的靈敏度值λ0在標示值λ的0.5~2.
0λ範圍（即0.5λ≤λ0≤2.0λ），方可用於細菌內毒素檢查，並且要按標示值使用。
4.2 檢品的干擾實驗
4.2.1 干擾實驗的目的判斷某個品種在某種濃度狀態下是否宜作細菌內毒素檢查，就需要對其作干擾實驗。
要求至少對每個廠家連續生產的3~5個批號（不包括亞批）的供試品進行干擾實驗，若鱟試劑的**以及供試品的配方有變化或生產工藝改變時，須重複進行干擾實驗［6］。《美國藥典》的細菌內毒素檢查法及fda關於鱟試劑的準則規定，用鱟試劑方法檢查任何一種藥品的內毒素含量之前，至少要做3批成品的干擾實驗，如果鱟試劑的**或製造工藝改變，或藥品的生產工藝、處方、成分改變，要重做干擾實驗；如果藥品的特殊組分的**或鱟試劑的批號改變，要用陽性產品對照來複檢鱟試劑方法對這一產品的檢查有效性。
4.2.2 干擾實驗的原理干擾實驗在《美國藥典》的細菌內毒素檢查法中稱為抑制或增強實驗。
其原理是比較鱟試劑與內毒素的反應在水溶液中進行和在檢品中進行的差異。也就是比較反應在不同介質中進行的差異無差異即無干擾，有差異即有干擾。
4.2.3 干擾實驗的方法干擾實驗是由兩部分實驗組成：
其一是鱟試劑與內毒素在水溶液中的反應實驗，這部分與鱟試劑的靈敏度複核實驗完全相同。其二是鱟試劑與內毒素在檢品溶液中的反應實驗，也就是在檢品中加入相應量的內毒素（或者說用檢品的溶液來稀釋內毒素），用來做鱟試劑靈敏度的「複核」，比較鱟試劑在不同介質中對內毒素的「靈敏度」是否一致。
4.2.4 陽性產品對照用smvd復溶鱟試劑，然後加入2 λ濃度的標準內毒素溶液與之反應，若反應結果為陰性，說明檢品對檢查有抑制作用。
若反應結果為陽性，說明檢品對檢查無抑制作用，但並未能表示無增強作用。 淘金者**范文中心
5 應用前景
細菌內毒素檢查法作為一種新技術載入藥典，成為一種法定的藥檢方法，反映了藥典標準水平、藥檢技術水平的提高，標誌著乙個國家製藥工業水平及藥品質量的提高。隨著歷史的發展，必將有更多國家的藥典收載細菌內毒素檢查法。它具有方法多樣化、自動化、微量化的特點。
細菌內毒素檢查法所具有的優點表明它比家免熱原檢查法更適應現代製藥工業的發展。它可以應用於藥檢，也可以用於藥品生產質量控制、臨床診斷及其它領域。該法用於藥品成品的檢查，屬於一種事前控制的質控手段，對提高藥品質量，避免造成藥品成批報廢有重要意義；在臨床上可作為快速診斷革蘭氏陰性細菌感染的疾病的一種輔助方法，但不能區分病原體。
其它在食品衛生、環境保護、電子工業（如超純水的檢查）等領域也涉及到細菌內毒素檢查的應用。
參考文獻：
［1］ 黃清泉,夏振民.藥品細菌內毒素檢查的實驗設計［j］.中國藥學雜誌,1997,32(2):72.
［2］ 王茂林.鱟試劑法檢查熱原的應用範圍［j］.中國醫院藥學雜誌,1990,10(4):41.
［3］ 高國政,顏錦.ph值影響細菌內毒素測定的實驗室研究［j］.中國藥學雜誌,1998,18(3):162. 淘金者**范文中心
［4］ 郭錄平.**影響鱟試驗的因素［j］.中國藥學雜誌,1996,31(3):187. :淘金者**范文是你生活，學習的好助手
［5］ 國家藥典委員會.中國藥典，ⅱ部［s］.北京：化學工業出版社，2000：附錄86.
［6］ 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中國藥典，ⅱ部［s］.北京：化學工業出版社，1995：附錄xxⅲ.
細菌內毒素檢查方法概述
一 本法系利用鱟試劑與細菌內毒素產生凝集的反應機理，以判斷供試品中細菌內毒素的限量是否符合規定的一種方法。細菌內毒素標準品系自大腸桿菌提取精製得到內毒素。以細菌內毒素國際標準品為基準物，以過協作標定，使標準品單位與國際標準品單位含義一致。用於標定細菌內毒素工作標準品和促裁鱟試劑靈敏度。細菌內毒素工作...
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005細菌內毒素檢查標準操作規程 藥品
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