一種快速鑑定細菌的方法

2021-03-11 17:41:29 字數 647 閱讀 1559

4. 細菌染色體dna的快速提取

取1.5 ml離心管,稱重。在管中加入100 l緩衝液i,從平板上刮數環菌於其中,振盪均勻,9 000r/min,3min。

棄上清液,稱重,計算出菌體質量。按照每毫克菌體10 l的比例,在離心管中加入緩衝液ⅱ,將菌體振盪均勻,放置於75℃反應15min得到染色體dna粗提液,直接用於後續pcr反應。

5. pcr擴增及產物測序

二、結果與討論

1. 細菌染色體dna快速提取方法的建立

研究試圖建立一種適合大批量樣本操作的細菌染色體dna快速提取方法,並要求所建立方法製備的染色體dna溶液不需經過任何後期處理便可直接用於後續的pcr反應。為此,對細菌染色體dna快速提取方法中的2個關鍵溶液(緩衝液i和緩衝液ⅱ)的配製和組成及其廣泛應用性進行了研究和分析。緩衝液i中含有2 mmol/l的edta(ph8.

0)和0.01 的tw-20。緩衝液ii由2mol/l的naoh溶液組成,並用非離子型濃度相關性ph緩衝劑小心調節緩衝液ⅱ的ph至13.

4。2. 提取的染色體dna質量分析

(1)瓊脂糖凝膠電泳檢驗

取細菌染色體dna粗提液10ptl進行瓊脂糖凝膠電泳,染色後凝膠成像。發現點樣孔內很亮,孔外有連續條帶存在。證明成功提取了22個測試菌株的染色體dna。

(2)pcr 產物檢驗

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