EB的危害及其實驗室安全使用預防措施

2021-08-14 16:49:29 字數 3261 閱讀 7044

在電泳實驗或其他核酸分離實驗中,常用eb(ethidium bromide,etbr)作非放射性的marker,來識別和顯示核酸條帶。eb是一種深紅色不易揮發的晶體,微溶於水。當被紫外線照射時能發出紅褐色的螢光。

儘管eb是一種高效的顯色劑,但它的高危險性要求特殊的安全管理和**流程。

人體危害 eb是一種強誘變劑(可能造成遺傳性危害),直接接觸有中等毒性。eb可以通過**吸收,因此應當避免一切與eb的直接接觸。eb對**,眼睛,口腔和上呼吸道系統有刺激性作用。

應將eb安全密封,並密閉存放於乾燥避光處。

安全預防措施良好的操作習慣可以降低危害接觸。

在通風廚使用粉狀或結晶eb時,或使用含eb的溶液或片劑時,為避免吸入eb,應避免與eb的直接接觸。

為避免**接觸到溶液中的eb,應戴手套、實驗服和防護鏡,並勤換手套。

要告知eb使用者eb的危險性、正確使用及**方法。此外,經培訓的才能通過實驗室化學衛生管理計畫,獲得chp(the laboratory』s chemical hygiene plan)的證書。擁有該證書者才算是按標準操作使用eb。

在使用含eb類材料前需制訂乙份eb安全使用說明。

進入工作區域需佩戴防護鏡並確認有可使用的洗眼及淋浴設施。

和其他化學藥品一樣,在eb的使用及放置房間內不准飲食。

使用後脫去手套及時洗手,徹底處理掉殘留的eb。

在使用uv照射eb時,戴上紫外線防護鏡或用紫外遮蔽玻璃以遮蔽。

緊急處理措施

誤入眼睛措施:如果eb不慎落入眼睛,立即用大量的冷水沖洗至少15分鐘。最好能用洗眼藥水進行擦洗。

誤接觸措施:如果**不慎接觸到eb,立即脫去被汙染的衣物。再用肥皂清洗接觸到的**後,大量的冷水沖洗至少15分鐘。

誤服措施:如果不慎誤服或吸入eb,將受害者移至通風處,並及時送醫救治。

洩漏汙染處理:如果eb不慎灑落在水槽或者下水道,請立刻告知相關管理部門。如果大量eb灑落,應立即通知在該工作域的所有人員,將人員疏散並開始清理被汙染的區域。

在未清理好現場的同時,應豎牌警告他人勿入。並為有關部門提供資料及協作。

若僅微量eb排入下水道並被及時發現,在確保安全的情況下可由實驗室熟知eb危害的人員進行清理。當然,清理eb的人員是必須經過安全培訓,並有防範意識和相應的處理裝置。如果實驗室的人員未經培訓或沒有處理裝置,請聯絡相關部門進行處理。

淨化處理:在清理微量灑落的eb時,需全程穿著防護服(按上文所描述的「安全預防措施」)。用紫外燈照射確定汙染的位置。

eb的螢光是很容易看到的。如果灑落的eb是粉末狀,用濕紙巾擦拭後並按程式清理。如果灑落的是液體,用乾紙巾吸乾後再用uv光檢查殘餘的eb,然後按程式清理。

當準備或使用除汙劑時配戴全面防護裝備(實驗服、手套和防護鏡)。在用eb前,需預先準備好除汙劑:4.

2克亞硝酸鈉(nano2, cas # 7362-00-0)和20毫公升的次磷酸(50%) (h3po2, cas # 6303-21-5),加入300毫公升水。

1)用紙巾蘸取去汙劑擦洗被汙染的區域,再用紙巾加自來水清洗5次,每次實用的紙巾都必須是乾淨未汙染的。

2)用紫外光檢查已清洗的區域,以確保所有eb被清除。必要時可重複步驟1。如果酸可能損害被汙染的表面,可用適量自來水稀釋去汙劑後再使用。

3)將所有使用過的紙巾用去汙劑浸泡1小時,取出並將附著的去汙劑擰乾收回容器內。被處理時使用的手套和其他物件可雙層包裹再扔棄。

4)在去汙劑的容器上標上eb去汙劑,並註明成分。將去汙使用過的物件打包,後續處理程式如下。

(1) 對於eb含量大於0.5mg/ml的溶液,可如下處理:

①將eb溶液用水稀釋至濃度低於0.5mg/ml;

②加入一倍體積的0.5mol/l kmno4,混勻,再加入等量的25mol/l hcl,混勻,置室溫數小時;

③加入一倍體積的2.5mol/l naoh,混勻並廢棄。

(2) eb含量小於0.5mg/ml的溶液可如下處理:

① 按1mg/ml的量加入活性炭,不時輕搖混勻,室溫放置1小時;

② 用濾紙過濾並將活性碳與濾紙密封後丟棄。

1 lunn, g. & sansone, e.b.

, destruction of hazardous chemicals in the laboratory, john wiley & sons, new york, 1990, p. 119-120.

在下表中明確了各類含eb廢液的處理方法。從管道排放eb溶液前,先用紫外燈照射是否還有螢光。如果仍有螢光,那該溶液仍需處理後才能從管道中排放。

1)過濾,用木炭顆粒過濾器或eb**器。類似處理的裝置有schleicher & schuell 的eb**系統,以及emd biosciences的eb吸附器,這兩樣可在vwr公司購買到。或可適用fluka的eb/sybrgreen 清除劑,或sigma的eb**器,這兩個可在sigma-aldrich公司購買到。

注意該產品的指示,不要超過**器的能力。一旦超過它們的使用限度,過濾器或提取器必須經生物安全處理後拋棄

2)吸收,現已有專門去除eb的「茶包」式產品,專門設計用於eb去汙,如qbiogene的greenbag eb廢棄處理套件和amresco的脫色袋。按照產品指示,確保有足夠的茶包吸收溶液中大量的eb。一旦已經用盡,「茶包」必須經相應部門安全處理後拋棄。

拋棄處理將實驗室處理廢棄eb的方法和程式記錄下來,並整合到實驗室的標準作業程式中。關於不同型別的eb物品的處理方法,請參閱下表。

廢棄eb處理指南

廢液描述廢棄處理方法

緩衝液 eb濃度較低

(< 0.5mg/l) 在排入下水道之前,緩衝液請先用過濾器或「茶包」處理。確定緩衝液中在紫外燈下無螢光方可下排。

儲備溶液,氯化銫溶液 eb濃度較高

( 1-10mg/ml) 濃度之高,使得處理eb的過濾和吸收方法都無法適用。將這些儲液交由相關部門專業人員處理。

處理用過的過濾器和「茶包」 eb在(過濾/吸收過程)汙染將已用的過濾器和茶包明確標記。用過的過濾器和茶包交由相關部門處理。

凝膠 eb濃度低

(3-5mg/l) 先將凝膠晾乾,裝入指定的袋子中做好標記後,再交由相關部門處理。

汙染的物件手套,清理灑落eb用過的材料,以及實驗室中汙染eb的物品破碎的玻璃和銳器必須放入堅固的容器,其他材料可擺放整齊後裝入袋中做好標記,交由相關部門處理。

晶體及粉末含有較純或濃縮過的eb 交由相關部門處理。

有效處理後的廢液,再確保檢測不到eb後方可排入下水道(核實螢光)。

處理eb的其他方法可改用低毒性的其他材料來替代eb( 例如,可用sybr safetm 對dna凝膠染色),以減少在實驗室裡可能發生的危險。處置eb的替代品也需有相應部門決定其處理方法後再做廢棄處理。如有任何疑問,請聯絡該部門。

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