二．石蠟包埋的注意事項
1: 取材和固定：根據客戶要求將切取3mm大小的組織塊。
2: 脫水和透明：
3：浸蠟和包埋：
浸蠟：將透明的組織放入蠟杯（ⅰ）→蠟杯（ⅱ）→蠟杯（ⅲ），一般總的浸蠟時間為２－４小時左右。:
4：包埋：
1）組織浸入石蠟後，包埋前將組織移入包埋用石蠟杯內。從恆溫箱取出置於三角架上，其下點燃酒精燈，以保持石蠟的溶解狀態。
2）準備好包埋框，將包埋用的鑷子在酒精燈上加溫（防止鑷子粘蠟）後，左手持蠟杯，右手把加溫的鑷子放在蠟口（直立狀）倒蠟時讓石蠟沿鑷子注入包埋框內。
3）迅速鑷取組織塊放入包埋框石蠟內，切面朝下放正置入框底並輕輕壓平，以保證不再有氣泡。
4）待石蠟表面凝固前將標籤貼於其上，需注意勿使標籤與標本混淆，當蠟塊冷至蠟面有透明蠟膜時，浸入冷水中迅速使其冷卻，否則蠟內常形成結晶。
5）蠟塊完全硬固後除去銅框，以保證蠟徹底凝固，立即修切，準備製成切片或儲藏備用。
5：切片製作：
1）.室溫過高時，可將修好的蠟塊放到冰箱中冷卻一定時間。在夏季時可用冰塊冷卻刀和組織塊，減少刀與組織塊在過程中產生的熱時，使石蠟保持合適的硬度以利於切片。
2）.切片經30%的乙醇初展後，再用載玻片撈起蠟帶放入展片儀水盒內（一般水溫為45℃左右）。待蠟片帶中的組織展平後，即可進行分片和撈片。
3）. 切片時要及時清潔刀口、除去蠟屑，否則易引起破碎。
6：貼片：
待切片在恆溫水內充分攤開展平後，將載玻片垂直插入水中以毛面輕靠切片，並用毛筆將切片一邊撥於玻片上，隨即將玻片直立提起。
三、免疫組化:
1) 取出並恢復至室溫，pbs沖洗，3分鐘×3次。
2) 3% h2o2去離子水（無色液體）孵育10分鐘，以消除內源性過氧化物酶活性，pbs沖洗，3分鐘×3次。
3) 滴加試劑a（藍色液體——封閉用正常血清工作液）室溫孵育20分鐘，傾去，勿洗。
4) 滴加按照：lc3: 1:100, lamp-2: 1:100比例稀釋的一抗放入溼盒內4℃過夜
5) 取出並恢復至室溫，pbs沖洗，3分鐘×3次。
6) 滴加試劑b（黃色液體——生物素化二抗工作液），室溫或37℃孵育10~15分鐘。
7) pbs沖洗，3分鐘×3次。
8) 滴加試劑c（橙色液體——辣根酶標記鏈黴卵白素工作液），室溫37℃孵育15分鐘。
9) pbs沖洗，3分鐘×3次。
10) dab顯色劑顯色。
11) 自來水充分沖洗（約5分鐘）。
12) 蘇木素復染，脫水，透明。
13) 中性樹脂封片。
四實驗結果及分析
實驗結果：棕黃色部位為抗原陽性表達部位。
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