免疫組化試劑的選擇
一抗的正確選擇與使用
1. 首菜單轉殖抗體：單轉殖抗體具有高特異性、高親和力、交叉反應少等特點，避免與細胞或組織蛋白的非特異性結合，減少染色背景。
2. 多轉殖抗體：最好是經樣本**種屬正常血清吸附過，盡可能的減少非特異性著色背景。加一抗前，用封閉液（可以是bsa或二抗**的正常動物血清）充分封閉，以阻斷非特異性結合位點。
3. 跨膜分子的抗體選擇：要注意免疫原是整個蛋白分子或是胞外區、胞內區。對於胞內區抗體，染色時需要使用穿孔劑，而胞外區抗體不必使用。
4. 正確使用：一般**商都會提供稀釋範圍和使用方法。
但由於**商質撿所用組織不同，實驗條件和操作人為誤差，常常需要客戶自己再重新選擇比例。一般從**商提供稀釋比例的1/10稀釋度始，作倍比稀釋。
5. 儲存：一抗體一般為液體
二抗的正確選擇與使用
1. 種屬**要匹配：根據所用一抗選定二抗。
一般來說，如果一抗是小鼠原性，二抗應選擇兔/山羊或其它種屬抗小鼠的抗體。目前，美國vector公司和zymed公司都有開發的用小鼠抗體檢測小鼠組織的試劑盒，即一抗**於小鼠，該試劑盒採用了通用非特異性封閉液和專利封閉內源性小鼠ig的封閉液，可以得到清晰的染色背景。
2. 注意抗體同種型和亞型：確定一抗同種型和亞型後，可以選擇抗一抗**種屬廣譜ig或針對一抗亞型的二抗。如一抗是小鼠igg1, 可以選用山羊抗小鼠的ig或igg1的二抗。
3. 正確使用：也需要重新選擇稀釋比例。一般從**商提供稀釋比例的1/10稀釋度始，作5倍比稀釋。
檢測系統的正確選擇
檢測系統一般有酶法、螢光法和親和放大系統：親和素－生物素放大系統很常用，但由於內源性親和素和生物素廣泛存在，經典的sp、srabc和lsab法等常出現背景著色，尤其是內源性生物素豐富的肝、腎染色時很難避免。zymed公司研發的非生物素放大試劑盒nab和 picture plus試劑盒，採用多聚氨基酸支架偶聯多個抗體和酶、螢光素等訊號檢測分子起到良好的放大效果，具有高敏、背景清晰等優點。
對於齧齒動物組織的免疫化學檢測：由於齧齒動物非特異性結合強，最好選用美國vector公司和zymed公司都有開發的用小鼠抗體檢測小鼠組織的試劑盒。
設立陽性對照和陰性對照
實驗設立對照是證明實驗系統正確性的標尺，為查詢實驗原因提供重要線索。
1. 陽性對照的選擇：陽性對照是證明整個實驗體系正確的重要依據，主要涉及所用緩衝液、稀釋液、二抗和檢測系統等因素。
尤其在結果出現無訊號時，為查詢原因的提供重要線索。具體選擇方法請參閱抗原修復有關章節。
2. 陰性對照的選擇：有兩種：
一種是自身對照，指測試組織本身非抗原表達部位。一種是外部對照，指已證實不表達檢測抗原的組織。設定陰性對照表明檢測抗原特異性和非抗原表達部位的非特異性結合。
一般自身對照比較常用，在同一張測試片上作，減少了操作誤差，對照更可靠。
試劑儲存
抗體試劑儲存：抗體儲存容器應由不吸附蛋白質的材料製成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼矽酸玻璃。抗體濃度越高（濃度大於10mg/ml），越穩定，易儲存；濃度低時，應加0.
1%-1.5%的牛血清白蛋白作保護劑；必要時需要加0.01-0.
15％nan3防腐劑以延長儲存時間。 酶標記抗體在應用防腐劑時要注意不能用nan3，否則會抑制酶的活性。-抗體濃縮液應在-20℃儲存，可以長達兩年；用時取出，室溫融解，如一次或短時間用不完，應進行小量分裝，－20℃儲存，避免反覆凍融；融解後抗體於2－8℃可以儲存乙個月。
（請參閱免疫組化基礎知識有關章節。）
試劑盒儲存：完整試劑盒未開啟前於2－8℃可以儲存一年，開啟後，應根據說明書要求對具體試劑進行適當存放。一般標準品應放置－20℃，用不完的抗體試劑應小量分裝－20℃儲存。
免疫組化常見問題分析及處理方法詳見第十二章。
免疫組化相關知識
免疫組化，是應用免疫學基本原理 抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑 螢光素 酶 金屬離子 同位素 顯色來確定組織細胞內抗原 多肽和蛋白質 對其進行定位 定性及定量的研究，稱為免疫組織化學技術 immunohistochemistry 或免疫細胞化學技術 imm...
免疫組化實驗報告
二 石蠟包埋的注意事項 1 取材和固定 根據客戶要求將切取3mm大小的組織塊。2 脫水和透明 3 浸蠟和包埋 浸蠟 將透明的組織放入蠟杯 蠟杯 蠟杯 一般總的浸蠟時間為 小時左右。4 包埋 1 組織浸入石蠟後，包埋前將組織移入包埋用石蠟杯內。從恆溫箱取出置於三角架上，其下點燃酒精燈，以保持石蠟的溶解...
大鼠腦組織石蠟切片的免疫組化染色體會
摘要 腦組織石蠟切片的染色結果，易出現切片染色不清楚，脫片 假陽性，假陰性出現。免疫組化這些結果的出現，與組織固定，抗原修復，內源性過氧化物酶活性的滅活，抗體質量，顯色試劑質量，蘇木素質量，時間上的把握及技術人員熟練程度有關，得出了免疫組化的過程的很多細節及各個步驟的主要的注意事項，提高腦組織切片的...