實驗一：細胞的形態觀察及其大小測量
一、實驗目的：
1、通過對原核和真核各種形態細胞的光學顯微鏡觀察，了解細胞的形態及其顯微結構；
2、學習顯微測量的方法，對細胞的大小有一直觀認識。
二、實驗材料和儀器：
小白鼠肝細胞切片；雞血紅細胞；蠶豆葉片橫切片；
普通光學顯微鏡；目鏡測微尺；鏡台測微尺；載玻片；蓋玻片。
三、實驗步驟：
(一)細胞形態觀察
l、動物細胞的觀察
（1）人肝細胞切片：在顯微鏡下仔細觀察肝細胞的形態構造。
（2）雞血細胞塗片的觀察：觀察血細胞的組成；紅細胞、白細胞、血小板的形態特點。
2、植物細胞的觀察
（1）取蠶豆葉片橫切片的觀察：注意表皮細胞和葉肉細胞的基本結構。
（二）細胞的大小和測量
1、卸下目鏡的上透鏡，將目鏡測微尺刻度向下裝在目鏡的焦平面上，再旋上目鏡的上透鏡。
2、將鏡台測微尺刻度向上放在鏡台上夾好，使測微尺分度位於視野**。調焦至能看清鏡台測微尺的分度。
3、小心移動鏡台測微尺和轉動目鏡測微尺(如目鏡測微尺分度模糊，可轉動目鏡上透鏡進行調焦)，使兩尺左邊的一直線重合，然後由左向右找出兩尺另一次重合的直線。
4、記錄兩條重合線間目鏡測微尺和鏡台測微尺的格數。按下式計算目鏡測微尺每格等於多少μm：
鏡台測微尺的格數
目鏡測微尺每格的微公尺數10
目鏡測微尺的格數
四、實驗結果：
1、目鏡校正：40倍顯微鏡目鏡測微尺每格的微公尺數=17/70=0.24
2、細胞大小的測量：
五、作業與思考：
1、血細胞按含量高低，主要含有：紅細胞，白細胞，血小板。
白細胞最大，紅細胞次之，血小板最小。紅細胞：主要的功能是運送氧。
白細胞：主要扮演了免疫的角色，當病菌侵入人體時，白細胞能穿過毛細血管壁，集中到病菌入侵部位，將病菌包圍，吞噬。血小板：
止血過程中起著重要作用。細胞形態見下圖。
2、植物細胞一般比動物細胞大一些。形態圖見下。
3、在不同放大倍數下，測定的細胞大小基本一致，但有一些偏差。放大倍數越大，在視野中同等實際距離下的兩點視野距離更大，而更容易測量準確。
實驗二：pas（periodic acid schiff）反應顯示糖原和其它多醣物質
一、實驗目的
1、熟悉pas法原理及操作步驟；
2、觀察pas反應的染色結果，並觀察多醣在組織細胞中的分布。
二、實驗原理
多醣是由多個單醣分子縮合脫水而生成的化合物。一些不溶性的多醣構成植物和動物的骨架，如植物的纖維素和動物的甲殼素，一般稱為結構多醣。另一些多醣在生物體內作為能量貯存，如澱粉（植物）和糖元（動物），在需要時可以通過生物體內酶系統的作用分解，釋放出單醣。
三、實驗用品：
過碘酸酒精溶液、schiff試劑、亞硫酸水溶液、蘇木精溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯（1：1）。
梯度乙醇溶液：100％，95％，90％，80％，70％，50％各兩份，乙份用於脫臘覆水，乙份用於脫水。
載玻片 、蓋玻片、染色缸、顯微鏡 、小燒杯、膠頭滴管、鑷子、刀片、土豆；小鼠肝細胞石蠟切片。
四、實驗步驟:
（一）土豆切片的觀察
製作土豆徒手切片→過碘酸處理15～30min→70%乙醇1min→ schiff 試劑15min → 亞硫酸水漂洗2～3次 → 蒸餾水漂洗 → 鏡檢
（二）小鼠肝細胞切片的觀察
取鼠肝石蠟切片 → 二甲苯脫蠟約 10min → 二甲苯+100%乙醇（3 min）→梯度乙醇脫二甲苯，在各濃度乙醇（100％，95％，90％，80％，70％，50％）中約 2～3 min → 過碘酸氧化 15～30 min →蒸餾水漂洗 → schiff 試劑 15～30 min →亞硫酸水漂洗 2～3 次 →蒸餾水漂洗 → 蘇木精染色 10 min → 流水沖洗→梯度乙醇脫水（50％，70％，80％，90％，95％，100％），在各乙醇濃度中約 2～3 min →100%乙醇+二甲苯 2～3 min→二甲苯適度透明 → 指甲油封片 → 鏡檢
五、實驗結果：
六、作業與思考:
1、描述土豆切片和鼠肝切片中糖原分布特點。
土豆切片中，多醣多在細胞質液泡中。
鼠肝切片中，多醣多在靠近核的區域。
2、影響 pas 反應染色效果的關鍵步驟是什麼？
camey固定液固定；schiff 染色液染色；對分色的控制。
3、如何製作徒手切片？應注意什麼才能得到薄而均勻的切片？
應注意需要連續快速地切下多片薄片，並從中選出較好的切片。
實驗三：葉綠體的分離與螢光觀察
一、實驗目的：
1、通過植物細胞葉綠體的分離,了解細胞器分離的一般原理和方法。
2、觀察葉綠體的自發螢光和次生螢光,並熟悉螢光顯微鏡的使用方法。
二、實驗原理：
將組織勻漿後懸浮在等滲介質中進行差速離心，是分離細胞器的常用方法。將勻漿液1000r/min的條件下離心2min, 以去除其中的組織殘渣和未被破碎的完整細胞。然後，在3000r/min的條件下離心5min，即可獲得沉澱的葉綠體(混有部分細胞核)。
某些物質在一定短波長的光（如紫外光）的照射下吸收光能進入激發態，從激發態回到基態時，就能在極短的時間內放射出比照射光波長更長的光，這種光就稱為螢光。若停止供能，螢光現象立即停止。有些生物體內的物質受激發光照射後，可直接發出螢光（稱為自發螢光）。
有的生物材料本身不發螢光，但它吸收螢光染料後同樣也能發出螢光（稱為間接螢光）。
三、實驗材料和儀器：
普通離心機,粗天平,螢光顯微鏡，剪刀，研缽，移液管，漏斗，滴管, 10ml刻度離心管,紗布若干, 無螢光載玻片和蓋玻片，新鮮菠菜，0.35mol/l氯化鈉溶液,0.01%吖啶橙(acridine orange)、
四、實驗步驟：
1、葉綠體的分離
（1）選取新鮮的菠菜嫩葉，洗淨擦乾後，去除葉梗及粗脈並剪碎，稱取2g左右，置於預冷的研缽；
（2）加10ml的0.35moll-1 nacl溶液研磨勻漿；
（3）用6層紗布過濾，濾液盛於燒杯中；
（4）取濾液4ml於1000rpm離心2min，棄去沉澱；
（5）將上清液3000rpm離心5min，棄去上清液，沉澱即為葉綠體（混有部分細胞核）；
（6）沉澱用0.35moll-1nacl溶液懸浮。
2、葉綠體的觀察
（1）滴葉綠體懸浮液一滴於載片上，加蓋片；在普通光鏡下觀察，注意觀察所分離的葉綠體的形態以及其是否完整。
（2）滴葉綠體懸浮液一滴於無螢光載片上，加無螢光蓋片；在螢光顯微鏡下觀察葉綠體有無自發螢光，其顏色如何。
（3）滴葉綠體懸浮液一滴在無螢光載片上，再滴加一滴0.01％吖啶橙螢光染料，加無螢光蓋片後即可在螢光顯微鏡下觀察其次生螢光。
3、完整細胞中的葉綠體觀察
（1）用鑷子撕取一片菠菜葉子表皮，平鋪於載玻片上，滴加一滴提取緩衝液，加蓋片後輕壓，備用。
（2）用鑷子撕去菠菜葉子的表皮，用刀片刮下一些葉肉細胞，放於載玻片上，滴加一滴提取緩衝液，加蓋片後輕壓，備用。
（3）將以上兩種製片進行一下三種方式的觀察：
a、通光鏡下觀察。
b、光顯微鏡下觀察。
c、加一滴0.01％吖啶橙螢光染料，加無螢光蓋片後，在螢光顯微鏡下觀察。
五、實驗結果:
六、作業與思考：
1、描述你所觀察到的實驗現象，自發螢光和次生螢光的區別？
自發螢光：有些生物體內的物質受激發光照射後，直接發出的螢光稱為自發螢光，如葉綠素的火紅色螢光。
間接螢光：有的生物材料本身不發螢光，但它吸收螢光染料後同樣也能發出螢光，則稱為間接螢光，如葉綠體吸附吖啶橙後可發橘紅色螢光。
2、葉綠體分離的原理是什麼？操作過程中應注意什麼？
通過研磨綠色植物葉片使葉肉細胞破損，葉綠體被釋放到提取液中，再通過等滲介質中差速離心去除雜質， 再次離心，則可分離出葉綠體沉澱。
應注意須在低溫下迅速提取，且須注意等滲液溶度，離心速度和時間的把握，避免葉綠體破裂。
實驗四：吖啶橙(acridine orange)染色
觀察口腔上皮螢光
一、實驗目的
1、熟悉螢光顯微鏡的原理及使用方法。
2、觀察螢光染料染色後結合物發出的螢光。
二、實驗原理
吖啶橙螢光染料可與細胞內dna和rna結合。其吸收光譜405nm，發射的螢光光譜是530～640nm，因此，吖啶橙和不同的細胞成分結合後，可發射紅橙黃綠藍各色螢光。
三、實驗用品
螢光顯徽鏡、載玻片、蓋玻片、染色缸、牙籤；口腔黏膜上皮細胞臨時製片；
0.1mol/l ph7、0 pbs液。0.1％吖啶橙原液、95％乙醇
四、實驗步驟
1、用牙籤刮取口腔上皮細胞塗在乾淨載玻片上；
2、95％乙醇溶液固定5min；
3、滴加0.01％吖啶橙染液染色5min；
4、用pbs緩衝液緩慢沖洗；
5、加蓋玻片鏡檢。
五、實驗結果
實驗五：植物細胞骨架的光學顯微鏡觀察
一、實驗目的
掌握植物細胞骨架的製備方法，並用光鏡觀察洋蔥內皮細胞的骨架網路結構。
二、實驗原理
細胞骨架(cytoskeleton)，是細胞內以蛋白質纖維為主要成分的網路結構，根據蛋白質纖維的直徑、組成成分和組裝結構的不同可分為微絲、微管和中等纖維。本實驗採用去垢劑tritonx-100的緩衝液處理植物材料時，可將細胞的膜結構和大部分蛋白質抽提掉，但細胞骨架系統的蛋白卻被儲存下來，後者用考馬斯亮藍r250染色，在光學顯微鏡下可見一種網狀結構。
三、實驗用品
1、器材：顯微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、滴管、擦鏡紙、50ml燒杯；
2、實驗材料：洋蔥鱗莖；
3、試劑： ph6.8的磷酸緩衝液、m-緩衝液、1%tritonx-100、3%戊二醛、0.
2%考馬斯亮藍r250 染液、50％，70％，95％乙醇、）叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性樹膠。
細胞生物學作業
可以假設那個原始的祖先細胞是所形成的第乙個僅有的細胞。5 相同點 1 有細胞膜細胞質，均有核醣體，均能進行轉錄與翻譯過程合成蛋白質。2 均有dna和rna，且均以dna為遺傳物質。區別 1 大小區別 原核細胞小 真核細胞大。2 種類區別 細菌 藍藻 放線菌 衣原體 支原體 動物 植物 真菌 衣藻 綠...
細胞生物學實驗教學實踐總結
教學實踐的主要內容 2010 2011學年第一學期我在冀蘆沙老師的耐心認真指導下順利完成了教學實踐,此次教學實踐的主要內容是準本細胞生物學實驗所需要的實驗藥品及批改細胞生物學實驗報告,本次教學實踐的主要內容是10個細胞生物學實驗專案，分別是 實驗一 特殊光學顯微鏡的結構與使用，主要內容是掌握暗視野顯...
細胞生物學章節提要第二章細胞生物學研究方法
細胞生物學研究方法 生物技術的發展進步對於理論的研究具有很大的推動作用。顯微成像技術 顯微成像技術包括光學顯微成像技術和電子顯微成像技術 間接成像技術。光學顯微鏡包括了簡單的雙筒顯微鏡 螢光顯微鏡 相差顯微鏡 暗視野顯微鏡。其中雙筒顯微鏡做一般的光學觀察，油鏡放大倍數較大。螢光顯微鏡用於對物質吸收 ...