醫學細胞生物學設計型實驗設計報告

2022-05-07 21:09:03 字數 2009 閱讀 8219

實驗專案:

利用聚乙二醇(簡稱peg)為介導物進行細胞融合

實驗原理:

細胞融合(cell fusion)是指兩個或多個細胞通過質膜融合形成單個雙核或多核細胞的現象稱為細胞融合,結果產生雜交細胞(hybrid)親本相同的融合細胞稱為同核體,反之稱為異核體。

細胞的融合是利用了細胞膜的流動性,在外界誘導作用下(常用的有滅活的仙台病毒、peg、電刺激等)各類細胞的膜結構發生改變,使兩細胞接觸點處脂膜的脂類分子發生疏散和重組,由於兩細胞介面處雙分子層質膜的相互親和以及彼此的表面張力作用,使細胞發生融合。所以本次實驗利用聚乙二醇的此性質,改變蟾蜍的血細胞膜的結構,進行細胞融合。

本次實驗實驗所用蟾蜍的血細胞,其原因有:1、蟾蜍血便宜,是單個散在性的細胞,不需要解離。2、蟾蜍血細胞具有細胞核,便於對融合細胞進行鑑定。

如果經過融合的細胞經鏡檢觀察仍然只有乙個細胞核那麼即為未融合,如果經過融合的細胞經鏡檢觀察有兩個或者兩個以上的細胞核即為融合成功了的細胞。

實驗步驟:

1、先將蟾蜍處死取蟾蜍血2ml和2ml alsver液混合後,再加上6ml alsver混勻後製懸液。(可在4℃下儲存)

2、取①溶液1ml加上4ml 0.85%的nacl溶液進行一下兩次離心處理。

1200r/min離心5min(去上清液再加入5ml 的0.85%nacl溶液

1000-1200r/min離心5min

3、將上步最後一次的沉降雪球(去上清液後,約0.1-0.2ml),加入gkn液,至1-2ml使之成10%的細胞懸液)

4、取上述10%的血球懸液1ml,加入3ml gkn液,使每毫公升含血球15000萬個,即15×107個/ml

5、取步驟4中所得懸液1ml+0.5ml的peg液,均勻滴片,在常溫下2-3min後即可鏡下觀察。

預期結果:

在高倍鏡下可以看到兩個或兩個以上的蟾蜍血紅細胞融合在一起。

教師日期:

實驗儀器、裝置、器具表

注意事項:

、胞融合對溫度的敏感很高,過高和過低的溫度都會嚴重影響細胞融合,其溫度應該控制在37℃~39℃範圍內。

、eg有毒性,此次實驗對peg的濃度要求很高,實驗時應該選用分子量在1500~6000peg的濃度以50%為好。

、ph是該驗細胞融合成功的關鍵,所以這次實驗所配製的試劑ph應控制在7.0~7.2。

、在鏡檢觀察時候應注意區別細胞融合與重疊的蟾蜍血紅細胞。

實驗專案:

細胞核的分離與鑑定

實驗原理:

細胞內各種結構的比重和大小都不相同,在同一離心場內的沉降速度也不同,用不同的轉速和不同的介質離心,就可以將細胞內各組分分級分離出來。

本實驗就是利用了細胞核的比重大小與細胞內其他組分不同,先將組織製成勻漿,再在懸浮的均勻介質中進行離心,分離,甲苯胺藍又可以將細胞核染成藍紫色,這樣,就可以鑑別分離出來的細胞核。

預期結果:

在顯微鏡下可見b切片中有藍紫色顆粒為細胞核

教師日期:

實驗儀器、裝置、器具表

實驗步驟:

1、 處死:斷頭處死小鼠,手提尾部使腹內血液盡量流出。

2、 取材:迅速開腹取肝,在盛有生理鹽水的小燒杯中反覆洗滌,取溼重約1g的肝臟組織放在燒杯中。

3、 勻漿:加入8ml預冷的0.25mol/l蔗糖-0.

003mol/lcacl2中溶液於燒杯中,盡量剪碎組織,再將剪碎的組織放入玻璃勻漿器中進行勻漿,勻漿器要處在低溫環境中,直到看不到明顯的組織塊為止。

4、 過濾:用8層紗布(生理鹽水或蔗糖溶液潤濕的紗布)過濾勻漿液。

5、 離心:將過濾後的勻漿液轉入離心管中,再在天平上平衡每對離心管,2500r/min離心15min,取上清液於另一離心管中。剩下的沉澱和上清液和沉澱製成懸液。

6、 塗片:取上清液和懸液分別各製作一張塗片,編號為a 、b再自然乾燥。

7、 染色:分別在塗片a 、b上滴加甲苯胺藍染液,染色5~7min。

8、 洗滌:衝去染液,晾乾。

9、 鏡檢:結合實驗結果的描述,鏡下觀察分析。

注意事項:

1、 勻漿時要保持勻漿器處於低溫環境中。

2、 洗滌時沖洗的時間不宜過長。

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