常見發光免疫分析技術的比較

2023-02-07 06:54:03 字數 2010 閱讀 3743

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免疫學技術的迅速發展對精度的要求越來越高,一般的酶免檢測技術已逐漸無法適應這種形勢的需要。現今發展的主流已不再是用放射性同位素標記的測定方法(避免汙染環境及對人體損害),而是轉向於能在任何地方操作的快速均相和固相測定,最終趨向於能夠槍測到皮克或10負18摩爾級的、非同位素的、自動或半自動的實驗室測定技術,發光免疫分析技術順應了這一潮流,開創了免疫診斷的新紀元。

發光免疫分析是一種靈敏度高、特異性強、檢測快速及無放射危害的分析技術。70年代末以來得到了迅速發展,目前在國際上已經實現商品化和產業化的發光免疫分析產品,基本上可以分為:化學發光、時間分辨螢光(也稱時間延遲光致發光)、電化學發光(也稱場致發光和電致發光)幾種。

1、化學發光

化學發光是指在化學反應過程中發出可見光的現象。通常是指有些化合物不經紫外光或可見光照射,通過吸收化學能(主要為氧化還原反應),從基態激發至激發態。退激時通過躍遷(或將激發能轉移至受體分子上),釋放能量產生光子,以光形式放出能量從而導致的發光現象。

其主要特點為消耗發光劑。同時量子效率相對較低。

1.1按化學反應型別分類:可分為酶促化學發光和非酶促化學發光兩類。

其中酶促化學發光主要包括辣根過氧化物酶(hrp)系統、鹼性磷酸酶(alp)系統、黃嘌呤氧化酶系統等。酶促發光的共同特點為發光過程中作為標記物的酶基本不被消耗,而反應體系中發光劑充分過最,因此發光訊號強而穩定,且發光時間較長。因此可採用速率法測量,故檢測方式簡單、成本較低。

酶促反應的主要缺點為工作曲線可能隨時間漂移,而且低端斜率容易呈非線性下移。而非酶促化學發光包括吖啶酯系統、草酸酯系統、三價鐵一魯公尺諾系統等。非酶促發光的共同特點為發光過程中標記物被消耗,同時作為標記物的發光劑是發光反應的瓶頸,即含量總是相對不足,因此發光訊號持續時間較短;如果直接在免疫反應杯中啟動發光反應,由於發光劑被很快消耗,故只能進行一次性測量。

所以重複性較差。為降低檢測成本並實現重複測量,目前普遍採用原位進樣加流動池的時間積分測量方式。因此儀器成本及維護費用較高,而且反覆使用的流動池可能導致交叉汙染;並目沖洗或進樣中產生的氣泡也會干擾測定;同時繁瑣冗長的沖洗過程也會成為提高檢測效率的瓶頸。

另外,使用磁性或非磁性微粒時,強烈的散射吸收作用也會降低靈敏度。1.2按發光持續時間分類:

可分為閃光和輝光兩類,閃光型發光時間在數秒內,如吖啶酯系統。其檢測方式一般採用原位進樣和時間積分法測量,即在檢測器部位加裝進樣器,並保證加入發光劑和檢測2個過程同步進行;同時以整個發光訊號峰的面積為發光強度。而輝光型發光時間在數分鐘至數十分鐘以上,如hrp一魯公尺諾系統、alp—amppd系統、黃嘌呤氧化酶-魯公尺諾系統等。

其訊號檢測無需原位進樣,一般以速率法測量,即在發光訊號相對穩定的區域任意點測量單位時間的發光強度。

測量化學發光反應的光強度,求得某些化學物質和生物物質的含量,尤其與免疫學方法結合以後形成的化學發光免疫測定法(clia),其既具有發光檢測的高度靈敏性,又具有免疫分析

的高度特異性,檢測快速,試劑無放射危害,檢測限達10負15 mol/l。

1.3評價:化學發光標記物已廣泛應用於抗原、半抗原和抗體的檢測,與放射性核素標記物相比較,它的優點在於安全(無放射危害)、穩定、測量快速、靈敏度高、線性範圍寬、自動化程度高、減少了人為的誤差。

檢測快速縮短了等待結果的時間,無需批量檢測可隨到隨測保證及時提供結果。缺點在於一般化學發光是標記催化酶或化學發光分子的發光反應,一般發光不穩定,為問斷的、閃爍性發光,而且在反應過程中易發生裂變,導致反應結果不穩定。此外。

檢測時需對結合相、游離相進行分離,操作步驟多,測試成本高。主要問題是化學發光的產生通常是瞬間完成的,發光的峰值很快衰減,再是本底較高和干擾妨礙應用。1.

4代表儀器

1.4.1美國拜耳公司最新診斷產品——acs:

180系列全自動化學發光免疫分析系統,以吖啶酯作為標記,量度ae標記物化學反應所產生的光量為基礎,靈敏度可達10負15 g/ml。1.4.

2美國雅培公司生產的axsym系列全自動免疫發光分析儀將3種技術於一機,可用於非均相標記微粒子酶免發光分析(meia)、離子捕捉發光分析(icia)和均相標記螢光偏振免疫發光技術(fpia),目前已有80多個檢測專案可供臨床應用。

化學發光免疫技術與時間分辨技術的異同點

概念化學發光免疫分析 chemiluminescenceimmunoassay,clia 是將具有高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應相結合,用於各種抗原 半抗原 抗體 激素 酶 脂肪酸 維生素和藥物等的檢測分析技術。是繼放免分析 酶免分析 螢光免疫分析和時間分辨螢光免疫分析之後發展起來的...

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