問題可能原因
解決辦法
離心後立刻吸取上清，如果發生了重懸，
吸取了不溶於去汙劑中的蛋白（沉澱）
則需要再次離心洗滌不完全
在洗滌過程中將試管蓋好蓋子，倒轉混勻幾次保證洗滌充分後再離心珠子沒有被充分封閉。確定使用所有bsa(fractionv)是新鮮配製的，用1％bsa的pbs封閉新鮮準備的珠子1hr。進行ip前使用pbs洗滌3-4次使用親和純化的抗體，有限預吸附過的抗體
確認推薦的抗體用量，減少抗體用量
非特異蛋白結合到珠子上了
高背景所用抗體純度不夠
抗體用量過多導致非特異性結合
細胞數過多/裂解物中蛋白含量過高導減少細胞/裂解物用量，推薦使用致洗脫液中含有大量非特異性蛋白10-500ug細胞裂解物
減少上樣量。也可以在進行ip前將裂解物和珠子預孵育從而達到預純化裂解物的目的。
降低抗體用量；在進行ip前將抗體交聯到珠子上；使用梯度glycine緩衝洗脫液.
非特異性蛋白結合抗體
在免疫沉澱過程中蛋白降解了
抗體洗脫過多靶蛋白中含有過多的洗脫抗體
根據蛋白表達資料確定檢測標本中有靶蛋白的表達。如果蛋白表達水平很低，
標本中無靶蛋白表達，或者表達量非常
可以考慮增加裂解物的用量，但這樣會
低增加非特異性結合。因此建議在進行ip前先對裂解物進行預純化
洗脫液中檢測不到靶蛋白
所有抗體量不足，難以捕獲靶蛋白靶蛋白沒有從珠子上洗脫下來抗體沒有和免疫吸附的珠子結合
根據推薦量使用抗體，並根據實驗結果優化抗體的用量.
確定使用正確的洗脫液並保證洗脫液的強度和ph值是適用於靶蛋白的根據抗體的亞型確定所用珠子是否合適（參照ip的方法部分）
根據說明書確定該抗體檢測的是變性還是天然蛋白；然後保證所用裂解液是恰當的（參照ip的方法部分）
所用裂解緩衝液不適合
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