細胞融合實驗

2023-01-22 12:03:03 字數 1194 閱讀 3227

細胞生物學實驗

題目:利用聚乙二醇(polyethyleneglycol,簡稱peg)為媒介物進行細胞融合

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一、實驗目的:

掌握利用聚乙二醇為介導物對各類細胞的融合方法。

二、實驗原理:

當前普遍認為聚乙二醇分子能改變各類細胞的膜結構,使兩細胞接觸點處質膜的脂類分子發生疏散和重組,由於兩細胞介面處雙分子層質膜的相互親和以及彼此的表面張力作用,使細胞發生融合。

三、實驗用品:

1. 顯微鏡,2.離心機,3.聚乙二醇(peg),4.雞血,液。6. 0.85%生理鹽水液

7. gkn液

nacl 8g,kcl 0.4g,na2hpo4·2h2o 1.77g,na2hpo4·h2o 0.

69g,葡萄糖2g,酚紅(phenolred)0.01g,溶於1000ml蒸餾水中。

8. 50%peg液

實驗前臨時配製,根據需要稱取定量peg(mw=4000),放入刻度試管或刻度離心管內,在水浴中加熱,使其溶化,如做細胞培養融合實驗,可用高壓蒸汽滅菌30min,待冷卻至50℃時,加入預熱至50℃等體積的gkn溶液,混勻。

四、實驗步驟:

1. 取製備的雞紅細胞懸液1ml,加入4ml0.85%生理鹽水,混勻後以1000~1200r/min離心5min。

2. 去上清夜後,將沉降血球(約0.1~0.2ml)加入gkn液至1~2ml,使之成為10%的細胞懸液。

3. 取上述10%血球懸液1ml加入3mlgkn液是每毫公升含血球15000萬個,即15×107個/ml。

4. 取上述濃度懸液0.5ml加入0.5ml 50%的peg液混勻,置於30℃水浴中加熱5min。

5. 用吸管吸取以上細胞懸液,滴在載玻片上,蓋上蓋玻片,置於顯微鏡下觀察。

五、實驗結果:

1. 細胞發生融合反應,觀察到融合反應各個階段細胞形態。

2. 實驗**:

圖1兩細胞開始接觸(10×40) 圖2兩細胞開始融合(10×40)

圖3融合過程中的兩細胞(10×40) 圖4完成融合後形成的新細胞(10×40)

六、實驗分析:

1. 通過細胞融合技術有很多應用,例如可以進行單轉殖抗體的製備以及植物新品種的培育。

2. 在高倍鏡下觀察時要注意調節好光線亮度,以達到最好的觀察效果。

3. 加入peg後要注意保溫時間,如果時間過短,可能導致實驗結果不理想。

實驗五雞血細胞融合

一 實驗目的 掌握細胞融合技術 二 實驗原理 peg是乙二醇的多聚化合物,peg可與水分子以氫鍵結合,在高濃度 50 的peg溶液中自由水消失,導致細胞脫水而發生質膜結構的變化,引起細胞融合 三 實驗用品 1 器材 離心機顯微鏡水浴鍋血球計數板離心管滴管注射器蓋玻片載玻片 2 試劑 alsever溶...

實驗六PEG法誘導細胞融合

實驗材料 1.材料新鮮雞血細胞。2.器材離心機 天平 顯微鏡 離心管 水浴鍋 血球計數板 載玻片 蓋玻片 離心管 容量瓶 燒杯和注射器等。3.試劑 1 0.85 生理鹽水。2 雙蒸水。3 肝素 肝素是一種抗凝劑,在體內外都有抗凝血作用。4 hanks hanks液是生物實驗中最常用的無機鹽溶液和平衡...

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