以計數酵母菌為例
(1)用血球計數板計數酵母菌懸液的酵母菌個數.
(2)樣品稀釋的目的是便於酵母菌懸液的計數,以每小方格內含有4-5個酵母細胞為宜,一般稀釋10倍即可.
(3)將血球計數板用擦鏡紙擦淨,在**的計數室上加蓋專用的厚玻片.
(4)將稀釋後的酵母菌懸液,用吸管吸取一滴置於蓋玻片的邊緣,使菌液緩緩滲入,多餘的菌液用吸水紙吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球計數室內.
(5)計數時,如果使用16格×25格規格的計數室,要按對角線位,取左上,右上,左下,右下4個中格(即100個小格)的酵母菌數.如果規格為25格×16格的計數板,除了取其4個對角方位外,還需再數**的乙個中格(即80個小方格)的酵母菌數.
(6)當遇到位於大格線上的酵母菌,一般只計數大方格的上方和右方線上的酵母細胞(或只計數下方和左方線上的酵母細胞).
(7)對每個樣品計數三次,取其平均值,按下列公式計算每1ml菌液中所含的酵母菌個數.
3.計算公式
(1)16格×25格的血球計數板計算公式:
酵母細胞數/ml=100小格內酵母細胞個數/100×400×10四次方×稀釋倍數
(2)25格x16格的血球計數板計算公式:
酵母細胞數/ml=80小格內酵母細胞個數/80×400×10四次方×稀釋倍數
思考題：
試驗43:動物細胞的原代培養
1．如何提高原代細胞培養的成功率?（就是注意事項）1．培養材料的選擇，盡量選取胚胎或幼小的生物體組織或者繁殖能力較強的組織，如腫瘤組織等。2．要注意無菌操作，其要求應高於外科手術。
3．整個取材操作要迅速，尤其孕鼠浸泡酒精時間不能過長，以保證胚胎細胞活性。 4．運用消化法時胰酶溫度應低於37~c，濃度只需平時消化細胞濃度的一半。因為此過程不像消化培養細胞時的1－10 min，而是至少20 min，先消化下來的細胞在此胰酶消化液中可存活10 min以上。
如果胰酶作用過強，則這些細胞易被損傷不易生存。 5．如使用組織塊法，則應待組織塊略乾燥，能粘附於瓶壁時再使之與培養基接觸，勿使組織塊漂浮起來。如果組織塊沒有貼壁，則細胞不易生長，即使生長也因沒有貼在瓶壁上而無法收集到。
2．為克服微生物汙染採取了哪些措施?1.器皿準備中的預防：
用於細胞培養的器皿應該嚴格消毒，做到真正潔淨；應該無菌的物品，要做到消毒嚴格、真正無菌2操作過程中的預防；主要包括：超淨台內放置的所有培養瓶瓶口不能與風向相逆，不允許用手觸及器皿的無菌部分，如瓶口和瓶塞內側；在安裝吸管冒、開啟或封閉瓶口操作時要經過酒精燈燒灼，並在火焰附件工作；吸取培養液、細胞懸液等液體時，應專管專用，防止汙染擴大或造成培養物的交叉汙染；使用培養液前，不易較早開啟瓶口；開瓶後的培養瓶應保持斜位，避免直立；不再使用的培養液應立即封口；培養的細胞在處理之前不要過早的暴露空氣中；
實驗44 傳代細胞的培養
1 細胞傳代培養的目的是什麼：
是組織培養常規保種方法之一，可以獲得大量實驗所需的細胞。
2 如何保證在傳代過程中不被微生物汙染
盡量靠近酒精燈火焰。每次最好只進行一種細胞的操作。每一種細胞使用一套器材。
培養用液應嚴格分開。如發現汙染，一般棄置汙染細胞，如必須挽救可加含有抗生素的培養基反覆清洗，隨後培養基中加入大量的抗生素，並經常更換培養基。
實驗46 動物細胞的凍存與復甦
1 如何運用「緩慢凍存，快速復甦」的原理儲存細胞
凍存管在4℃冰箱中存放30分鐘，轉放-20℃冰箱中1.5~2h，再轉入-80℃冰箱中 4~12h後轉移到液氮中（-196℃）儲存。復甦時直接放進37℃水浴鍋中。
2 凍存液的作用：保護細胞，可是溶液冰點降低，加之在緩慢凍結下，細胞內水分透出，減少了冰晶形式，避免細胞損傷。
實驗50 淋巴細胞轉化實驗
1 試比較淋巴細胞轉化實驗的優缺點
╮(╯▽╰)╭ 我不知道
2 淋巴細胞轉化試驗有何意義？
淋巴細胞轉化率的高低反映機體的細胞免疫水平可作為測定機體免疫功能的指標之一。淋巴細胞轉化試驗不但可作為**反應性疾病和免疫缺陷性疾病的輔助診斷，還可用於自身免疫性疾病和腫瘤**的研究以及預後判斷。一般情況下新生兒淋巴細胞轉化率稍高，老年人偏低。
實驗51 瓊脂免疫擴散實驗
1 雙向免疫擴散試驗主要用於哪些方面。
雙向免疫擴散可根據沉澱線的位置、數量、形狀以及對比關係，對抗原或抗體進行定性分析，常用於抗原和抗體的純度鑑定以及抗體效價測定。
該方法簡便易行，結果穩定可靠，臨床曾用於診斷和分析某些疾病，如檢測afp、hbsag等。但敏感度較低，試驗所需時間較長，只能定性，不能定量，僅適用於大量普查專案。
2 為什麼抗原、抗體要選擇適當比例？
抗原抗體反應有乙個平衡,濃度不合適,影響免疫複合物的形成。在比例適當處可形成可見的沉澱線。
53 酶聯免疫吸附試驗 elisa
1 elisa有哪些型別，其原理各是什麼？
（1） 雙抗體夾心法。。。原理：利用連線於固相載體上的抗體和酶標抗體分別與樣品中被檢測抗原分子上兩個抗原決定簇結合，形成固相抗體-抗原-酶標抗體免疫複合物。
由於反應系統中固相抗體和酶標抗體的量相對於待測抗原是過量的,因此複合物的形成量與待測抗原的含量成正比(在方法可檢測範圍內)。測定複合物中的酶作用於加入的底物後生成的有色物質量(od值)，即可確定待測抗原含量。 若固相載體上的抗體和酶標抗體分別與樣品中被檢測抗原分子上兩個不同的抗原決定簇結合，則屬於雙位點夾心法。
若採用固相載體上的抗原和酶標抗原分別與樣品中被檢測抗體分子結合，則是雙抗原夾心法。
（2） 間接法原理是將抗原連線到固相載體上，樣品中待測抗體與之結合成固相抗原-受檢抗體複合物，再用酶標二抗(針對受檢抗體的抗體，如羊抗人igg抗體)與固相免疫複合物中的抗體結合，形成固相抗原-受檢抗體-酶標二抗複合物，測定加底物後的顯色程度，確定待測抗體含量。
（3）競爭法可用於抗原和小分子半抗原的定量測定，也可對抗體進行檢測。已測抗體為例，使待測抗體和酶標抗體競爭與固相抗原結合，結果如待測抗體含量越多，與固相抗原結合的酶標抗體就越少，顯色越淺，二者呈負相關。
（4） 捕獲法 （亦稱反向間接法）elisa，主要用於血清中某種抗體亞型成分（如igm）的測定。原理設計為：先將針對igm的第二抗體（如羊抗人igmμ鏈抗體）連線於固相載體，用以結合（「捕獲」）樣品中所有igm（特異或非特異），洗滌出去igg等無關物質，然後加入特異抗原與待檢igm結合；再加入抗原特異的酶標抗體，最後形成固相二抗- igm-抗原-酶標抗體複合物，加酶底物作用顯色後，即可對樣品中待檢igm是否存在及其含量進行測定。
2 可能影響elisa 試驗結果的因素有哪些？
（1）試劑的選擇（2）加樣，可能原因：1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣；2）手工操作中，加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)；3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。（3）孵育，可能原因：
1)孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附於孔壁，難於清洗徹底；2)孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附於反應孔周圍，難以清洗徹底。（4）洗板，可能原因：1)採用手工洗板,孔與孔之間液體交叉2)採用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。
3)反應板過多造成洗板等待時間長。（5）顯色，可能原因：1)顯色劑配製後放置時間過長或使用過期顯色劑；2)加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。
（6）終止，可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。（（7）讀板，如讀板時板底不清潔等。
應保證酶標板清潔。
3 試述elisa技術的應用
elisa應用的範圍很廣，而且正在不斷地擴大，原則上elisa可用於檢測一切抗原、抗體及半抗原，可以直接定量測定體液中的可溶性抗原。酶免疫試驗（eia）結合光學顯微鏡或電子顯微鏡可進行抗原定位與結構的研究，用酶標記抗原或抗體結合免疫擴散及免疫電泳可提高試驗的敏感性。在實際應用方面可作疾病的臨床診斷、疾病監察、疾病普查、法醫檢查、獸醫及農業上的植物病害的診斷檢定等。
因此，它和生物化學、免疫學、微生物學、藥理學、流行病學及傳染病學等方面密切相關。
54 t淋巴細胞e-玫瑰花形試驗
1 簡述e-玫瑰花形試驗原理
由於人和動物的t細胞表面有綿羊紅細胞受體，因此紅細胞可以附到t細胞的周圍，形成玫瑰花樣的細胞團，而b細胞表面沒有綿羊紅細胞受體，不能形成玫瑰花環，因此可以用該方法鑑別t、b淋巴細胞，以及從血液中分離純化t細胞。
2 常用的淋巴細胞的分離方法有哪些？
[, ]：①粘附貼壁法；②吸附柱過濾法；③磁鐵吸引法。
[, ]①e花環沉降法；②尼龍毛柱分離法；③親和板結合分離法；④磁性微球分離法及螢光啟用細胞分離儀分離法。
病原生物與免疫學基礎實訓大綱
供中等衛生職業教育各專業用 一 實驗目的及實驗室規則 一 實驗目的 病原生物與免疫學基礎實驗是本課程的重要組成部分，通過實驗，加深學生對基本理論知識的理解，通過實驗操作，掌握有關微生物 寄生蟲及相關免疫學監測技術，學會常用的消毒 滅菌方法和無菌技術，建立無菌觀念，通過實驗結果的觀察和分析，培養學生實...
病原生物與免疫學基礎》實訓指導書 54課時
台山市敬修職業技術學校 病原生物與 免疫學基礎實訓 指導書目錄 實訓一實驗目的及實驗室規則2 實訓二顯微鏡油鏡的使用及保護方法3 實訓三細菌的基本形態與特殊結構觀察4 實訓四細菌塗片標本的製作和革蘭染色法5 實訓五常用培養基的製備6 實訓六細菌接種法7 實訓七細菌生長現象及代謝產物觀察8 實訓八細菌...
免疫學檢驗實驗教學改革的探索與實踐
作者 譚瀟 時代教育 下半月 2013年第16期 摘要 免疫學檢驗 是醫學檢驗專業重要的專業課程，實驗教學改革是本課程教學改革的重要內容。我們在教學中通過整合實驗教學內容 採用靈活多樣的實驗教學方法 改革實驗考核方法等途徑加強對實驗課教學改革，對提高學生的綜合素質起到了較好的作用。關鍵詞 免疫學檢驗...