明膠顆粒凝集法（pa）（初篩試驗）
——適用於日本富士公司pa（hiv 1/2）試劑盒
一、原理：日本富士試劑的成分是帶有滅活的hiv抗原致敏的乳膠顆粒，抗原是通過去汙劑裂解而純化的，顆粒凝集試驗是根據這些致敏顆粒與血清或血漿樣品中存在的hiv抗體相互凝集的原理。
二、試劑內包含物：
凍乾非致敏顆粒、凍乾致敏顆粒、陽性對照、試劑溶解液、標本稀釋液、吸頭
三、其他所需物品和儀器：
● 一次性手套
● 一次性pa專用板
● 加樣器（50μl、100μl、1ml）準確度±2％及一次性加樣頭
● 計時器
● 5％次氯酸鈉或其他認可消毒液
● 適於盛裝有可能受汙染物品的容器
● 微板振盪器，用於混合試劑顆粒與樣品
四、標本的收集和準備：
● 標本的收集詳見「血液樣品收集標準操作程式」
五、試劑準備
1、在開始實驗之前標本和試劑應處於室溫（18～25℃），實驗應在室溫下進行，使用後試劑放回2～8℃
2、分別吸取試劑溶解液2ml於凍乾非致敏顆粒試劑瓶和凍乾致敏顆粒試劑瓶中，充分搖勻，如果已經是溶解的試劑，則只需充分搖勻
六、試驗步驟
1、加75μl標本稀釋液於第一孔，加25μl於第二孔與第三孔。
2、加25μl標本於第一孔，充分抽提混合3－4次，吸出25μl於第二孔，充分抽提混合吸出25μl於第三孔，充分抽提混合後棄去25μl。
3、加1滴（25μl）的非致敏顆粒於第二孔，加1滴（25μl）的致敏顆粒於第三孔。
4、用振盪器充分混合後蓋上蓋子，置室溫（15℃～25℃）2小時後觀察結果，注意：反應期間不得再次振盪
5、每次試驗均要有陽性對照。
6、詳細記錄下試驗步驟、試劑批號、有效期、試驗時間及標本有關資料
七、結果判斷
1、陰性反應：顆粒在孔中間聚集成圓形小塊且邊緣光滑
2、不確定反應：顆粒在孔中凝集成緻密環狀且邊緣光滑
3、陽性反應：孔內有清晰的寬環且邊緣粗糙
4、強陽性反應：孔內的凝集顆粒形成均一的膜覆蓋在整個孔底
5、樣品與非致敏顆粒呈陰性反應，與致敏顆粒呈陽性反應時為可疑陽性血清。
6、樣品與非致敏顆粒及致敏顆粒均產生凝集者，則需將標本進行吸收處理後再檢測。（見吸收步驟）
7、對於陽性標本均按照「hiv抗體初篩陽性標本處理制度」進行處理
八、吸收步驟
1、加350μl未致敏顆粒溶液於小試管中
2、加50μl標本於試管中，充分混合並於室溫孵育20min（孵育期間用手搖動1－2次）
3、以2000rpm/min離心5min，小心地吸出上層液（標本稀釋度1：8）50μl於pa板的第2孔
4、加25μl標本稀釋液於微板的第3孔中
5、吸取第2孔內的液體25μl於第3孔中，充分抽提混合後棄去25μl。
6、加1滴（25μl）的非致敏顆粒於第二孔，加1滴（25μl）的致敏顆粒於第三孔。
7、用振盪器充分混合後蓋上蓋子，靜置室溫（15℃～25℃）2小時後觀察結果，注意：靜置期間不得再次振盪
8、每次試驗均要有陽性對照。
9、詳細記錄下試驗步驟、試劑批號、有效期、試驗時間及標本有關資料
九、稀釋倍數表
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