一、vazyme tunel系列
1)、高背景 (如未凋亡細胞的強綠色螢光背景)
a)、標記時間可能過長，可減少孵育時間。
b)、適當減少tdt酶及dutp的用量。
c)、在操作過程中保持細胞濕潤；標記反應完成，載玻片在用pbs洗一遍之後，可再用含0.1% triton x-100和5mg/ml bsa的pbs洗三次，每次5分鐘。
2)、螢光訊號弱或無訊號
a)、細胞建議用triton-100通透，切片用蛋白酶k處理，切片厚度小於10-15m時，通透10~30min即可，如果過厚則延長通透時間。
b)、延長標記時間至2h，並適當增加tdt酶及dutp的含量。
c)、陽性對照：設立凋亡模型。
3)、組織切片從載玻片上脫落
a)、組織切片粘附之前的包被不充分。在展片之前，用3-氨丙基三乙氧基矽烷包被顯微鏡載玻片比多聚賴氨酸效果更好。
4)、螢光顯微鏡或流式細胞儀分析只剩下很少的細胞
a)、在操作過程中丟失大量細胞：提高起始的細胞量。
b)、在製備貼到顯微鏡載玻片的細胞懸液時，離心過程中用含1%bsa的pbs洗細胞。
二、vazyme的annexin v系列
1)、annexin v-fitc染色失敗或者陽性率偏低
a)、要確定實驗中的誘導劑是否能產生凋亡：可通過設定確切凋亡誘導效果的陽性藥物對照來排除這一情況。
b)、貼壁細胞消化不當：annexinv跟ps的結合需要ca2+離子，但大多數胰酶中含ca2+的絡合劑edta，從而影響染色，建議使用無edta的胰酶。
c)、細胞用冷pbs洗滌離心後，應盡量去掉殘餘液體：殘留pbs中的磷酸根，會與游離的ca2+形成磷酸鈣沉澱。
d)、binding buffer是否被汙染：瓶蓋要緊閉，空氣中的co2進入後與游離的ca2+形成caco3沉澱，導致實驗的失敗。
e)、若為貼壁細胞，藥物誘導後漂浮的細胞也要收集，這部分細胞往往是凋亡陽性的細胞，丟棄會造成陽性結果偏低。
2)、假陽性
a)、細胞本身活力差：建議用台盼藍染色計算細胞的活力，台盼藍拒染的細胞應大於95%。若活力低，建議重新復甦細胞，通常剛復甦的細胞至少要傳代3次以後才能進行實驗。
b)、細胞操作不當：尤其是貼壁細胞消化過程中反覆劇烈吹打導致破壞細胞膜，使得假陽性偏高。
c)、誘導時間過長：一般情況下誘導幾個小時就可以出現早期凋亡，因此通常不需要處理大於48小時以上；誘導時間過長會使營養物質耗盡，導致細胞狀態差，假陽性結果偏高。
三、cell cycle assay kit
1)、g0/g1突然發生變化或漂移
a)、流式細胞儀管路中有氣泡或被阻塞：建議檢查管路是否通暢或是否有氣泡
b)、pi濃度不夠：建議增加pi的濃度
c)、與pi孵育的時間不夠長：建議增加孵育的時間
2)、峰寬
a)、流式細胞儀的流速太快，建議調整流式細胞儀的流速
b)、樣品中有氣泡，檢查樣品中是否有氣泡
c)、樣品中有壞死細胞，建議更換樣品
3)、無樣品峰
a)、可能樣品中無細胞核，壞死細胞過多，建議顯微鏡觀察樣品或更換樣品
b)、細胞碎片過多
四、exfect
1)、轉染效率偏低
a)、exfect與dna的比例不優化：通過預實驗測試exfect與dna的最佳比例(在2～5 μl/μg dna範圍內嘗試)。在後續的實驗中選擇轉染效率高、細胞毒性低的比例進行轉染。
b)、轉染前為細胞更換了無血清培養基：exfect/dna複合物的包裝反應需在無血清條件下進行，但使用包裝好的複合物進行轉染時，細胞培養基中應含有血清。多數情況下，在完全培養基中進行轉染，並且轉染後不更換培養基有助於獲得更高的轉染效率和更低的細胞毒性。
c)、轉染時細胞密度不合適：多數情況下，當細胞密度達到60%～80%時轉染可以取得較高的轉染效率。然而細胞型別不同，最適的轉染密度也不盡相同。
可以通過預實驗尋找較優化的轉染密度，並在後續實驗中保持這個密度。
d)、dna質量偏低(降解或包含內毒素)：為實現高效率、低毒性的轉染，應使用高質量的dna(高純度、無菌、無內毒素)。
e)、轉染試劑/dna複合物包裝體系中包含血清：當複合物包裝反應中存在血清時，轉染試劑/dna複合物無法正常形成。
f)、存在轉染抑制因素：當包裝反應和轉染過程中存在多聚陰離子聚合物時(例如：硫酸葡聚醣、肝素等)轉染將無法正常進行。因此應使用不含這些成分的培養基。
g)、細胞狀態偏差：傳代次數太少或者太多都將導致細胞對轉染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉染效率和穩定性、降低細胞毒性，應盡量使用適度傳代的細胞系，並在不同次實驗時保持細胞傳代次數的一致性。
2)、細胞毒性偏高
a)、轉染前為細胞更換了無血清培養基：exfect/dna複合物的包裝反應需在無血清條件下進行，但使用包裝好的複合物進行轉染時，細胞培養基中應含有血清。多數情況下，在完全培養基中進行轉染，並且轉染後不更換培養基有助於獲得更高的轉染效率和更低的細胞毒性。
b)、轉染時細胞密度不合適：多數情況下，當細胞密度達到60%～80%時轉染可以取得較高的轉染效率。然而細胞型別不同，最適的轉染密度也不盡相同。
可以通過預實驗尋找較優化的轉染密度，並在後續試驗中保持這個密度。
c)、exfect/dna複合物過量：轉染試劑過量會導致較高的細胞毒性。嘗試減少dna或者exfect的使用量。
d)、exfect/dna複合物加入培養基時分布不均勻：區域性轉染試劑/dna複合物濃度過高是導致細胞毒性偏高最常見的原因之一。當複合物新增到培養基之後，應平置培養皿，並前後、左右交替晃動。
e)、細胞狀態偏差：傳代次數太少或者太多都將導致細胞對轉染試劑敏感度的改變。因此，為了提高轉染效率以及轉染穩定性、降低細胞毒性，應盡量使用適度傳代的細胞系，並在不同次實驗時保持細胞傳代次數的一致性。
細胞生物學作業
可以假設那個原始的祖先細胞是所形成的第乙個僅有的細胞。5 相同點 1 有細胞膜細胞質，均有核醣體，均能進行轉錄與翻譯過程合成蛋白質。2 均有dna和rna，且均以dna為遺傳物質。區別 1 大小區別 原核細胞小 真核細胞大。2 種類區別 細菌 藍藻 放線菌 衣原體 支原體 動物 植物 真菌 衣藻 綠...
細胞生物學章節提要第二章細胞生物學研究方法
細胞生物學研究方法 生物技術的發展進步對於理論的研究具有很大的推動作用。顯微成像技術 顯微成像技術包括光學顯微成像技術和電子顯微成像技術 間接成像技術。光學顯微鏡包括了簡單的雙筒顯微鏡 螢光顯微鏡 相差顯微鏡 暗視野顯微鏡。其中雙筒顯微鏡做一般的光學觀察，油鏡放大倍數較大。螢光顯微鏡用於對物質吸收 ...
細胞生物學實驗報告
實驗一 細胞的形態觀察及其大小測量 一 實驗目的 1 通過對原核和真核各種形態細胞的光學顯微鏡觀察，了解細胞的形態及其顯微結構 2 學習顯微測量的方法，對細胞的大小有一直觀認識。二 實驗材料和儀器 小白鼠肝細胞切片 雞血紅細胞 蠶豆葉片橫切片 普通光學顯微鏡 目鏡測微尺 鏡台測微尺 載玻片 蓋玻片。...