盧文麗方肇勤
2007-01-17
一、實驗目的
1. 比較血虛證兩種不同造模方法的優劣。
2. 評價中藥複方的療效。
二、實驗材料
1．實驗動物：昆明種小鼠，雄性，40只。
2．藥物或試劑
乙醯苯肼（aph，為白色粉末狀固體，用時配製成2％溶液）、
環磷醯胺粉針劑：200mg×10支×1盒（用時配成10mg/ml溶液）、
無水乙醇500ml×1瓶、0.9%氯化鈉溶液500ml×1瓶或250ml×1瓶。
3．儀器或裝置
電子天平1臺，100ml柱形小燒杯2個，50ml/100ml量筒各1個，10ml刻度吸管2個，洗耳球1個，玻璃棒2根，60ml小口試劑瓶2個，標籤紙1張，酒精棉球，1ml一次性注射器數支，小鼠灌胃針2支。
以上為動物造模及藥物配製用材料，餘具體見各實驗指導。
三、實驗步驟
1．動物分組
隨機分為正常組a、環磷醯胺模型組b、乙醯苯肼模型組c、乙醯苯肼**組d等4組，每組10只。分籠飼養於內鋪墊料的塑料籠內，每籠等量。
2．2％乙醯苯肼溶液的配製
（1）電子天平取乙醯苯肼粉末1g，並將其小心倒入100ml小燒杯內；
（2）玻璃滴定管吸取10ml無水乙醇，注入燒杯內，玻璃棒攪拌；
（3）待粉末幾乎溶解完全後，50ml量筒量取30ml生理鹽水倒入燒杯內，攪拌。若仍有粉末未溶解，置於37℃水浴箱內一段時間即可。
（4）將完全溶解後的溶液倒入50ml量筒內，新增生理鹽水定容至50ml。將溶液倒入50ml小口試劑瓶內，貼好標籤，常溫下儲存。
3．藥物及劑量
採用四物湯**：當歸10g，川芎10g，白芍10g，熟地黃10g。給藥劑量按照**體重（60kg）的10倍計算。藥物煎煮濃度為0.4g/ml，約灌胃0.5ml/只。
4. 造模及給藥方法
5．自造模之日起，各組動物新增等量水及飼料，建議350ml/10只/籠，200g/10只/籠。
四、指標檢測
1．四診觀測
見小鼠全套四診觀測方法，於實驗第1、4、8日進行。
2．實驗室指標檢測
（1）第8日處死動物，檢測包括病理組織學、生物化學、骨髓及血塗片、分子生物學指標等。
（2）各組小鼠在實驗前一天，即第7日開始禁食不禁水。
（3）各項實驗室指標檢測詳見各實驗指導。
以上具體指標及方法參見各實驗指導。
五、注意事項
1．實驗動物觀察室應為開放式，溫度、照明、噪音、換氣等條件控制在規定的範圍內。墊料為木刨花，每週更換兩次。每天定時清潔動物房。
2．注意動物籠具、飲水瓶是否完好，發現損壞及時更換，及時新增飲水及飼料，並予以記載。
3．環磷醯胺溶液配置較為簡單，但乙醯苯肼溶液配製時需要注意，盡可能按照實驗步驟進行，並注意儲存條件。
4．四診觀察時應仔細並注意比較，並予以詳細記載。
5．灌胃**時間最好在每天同一時間。
6．如在實驗過程**現動物死亡的情況，應記載死亡日期、組別、編號及死亡原因。
六、思考題
1．結合相關參考文獻和本實驗比較乙醯苯肼和環磷醯胺模型。
2．中藥複方療效及原因分析。
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