條帶不規則

2023-01-01 17:24:05 字數 771 閱讀 9730

1). 電泳中,只有在恆壓的條件下電泳期間蛋白質才可以保持恆定的遷移速率。

2). 電泳時出現不規則的遷移條帶的原因多是電流不穩定。因此,要確保上下電泳槽中的電泳液與凝膠保持良好的接觸。

其他可能的原因包括:加樣孔中加入的樣品太多;樣品中鹽濃度太高;邊緣效應。在凝膠邊緣,遷移條帶出現「微笑」狀或樣品遷移速度減慢,可能是因為凝膠的中間比兩側更熱造成的,降低電壓有助於改善這種情況。

3). 染色和脫色一般用最短的時間已足夠。如果染色過夜,則需要更長的時間脫色。如果脫色後發現染色不徹底,還可以重新染色。

4). 非特異性的考馬斯亮藍染色主要是由於未溶解的染料沉積而成,應將染料溶液過濾後使用。

5). 樣品緩衝液中煮沸的樣品可以在-20℃儲存數週,但是反覆凍融會導致蛋白質降解。儲存在-20℃的樣品上樣前,應該先使樣品公升溫至室溫,使得sds沉澱溶解。

6). 樣品不能沉到加樣孔底部的原因是:sample loading buffer中沒有足夠量的甘油;或梳子安放不合適,使得加樣孔底部留有聚合的丙烯醯胺。

7). 製樣過程中,如果樣品混合物變為黃色,說明溶液太酸,應加入naoh調至藍色,否則樣品在電泳時會出現反常遷移。

8). 如果在4℃進行電泳,可以用十二烷基硫酸鋰(lids)替代sds,低溫下lids不會沉澱。

9). 蛋白質條帶的清晰與否取決於sds的級別和品牌。

10). 丙烯醯胺有劇毒,可導致中樞神經麻痺,也可能有致癌或致畸變的作用。可被正常**吸收。

如果接觸了丙烯醯胺粉末或溶液相,應立即用肥皂水沖洗。未聚合的丙烯醯胺應加入過量催化劑,以固體形式處理。

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