50%組織培養感染劑量法(t c i d 50)
此方法基於最高稀釋度下在hek-293 細胞中cpe 的形成,它是用於測定病毒滴度的標準方法。
一. 細胞準備:
1. 收集一瓶hek-293 細胞,計數。
2. 用dmem 2%準備20ml 10 5 /ml 細胞。
3. 用12 道排槍在2 塊96 孔板中每孔加入100ul 細胞懸液。
二. 稀釋病毒
a) 第1 管中加入0.9ml dmem 2%,其餘加入1.8ml。第1 管中再加入0.1ml 病毒儲存液。 b) 上下吸打5 次混勻。
c) 換用新槍頭。
d) 從第1 管中吸取0.2ml 加入第2 管中。
e) 倍比稀釋至最高稀釋度。
f) 用同一管病毒儲存液進行第2 輪稀釋。
g) 最後8 個稀釋液加入96 孔板,每孔0.1ml,每個稀釋度10 孔,2 孔為陰性對照。陰性對照孔中加入 0.
1ml dmem 2%監測細胞存活情況。加樣時從最高稀釋度開始。
h) 37℃培養10 天。
i) 10 天後倒置顯微鏡下觀察,計算每一排**現 cpe 的孔數。只要有一小點或是一些細胞出現 cpe 即為陽性,如果無法確定,可與陰性對照比較。
j) 計算每一排**現陽性的孔數。
k) 如果陰性對照中無任何cpe 且細胞生長良好,最低稀釋度100%陽性而最高稀釋度 100%陰性,則本測試即為有效。
三. t c i d 50 的典型結果(見下表)
植物組織培養實驗指導
2014.3 附錄培養基母液的配製 實驗老師準備 一 實驗目的 掌握培養基母液配製的方法。二 實驗原理 配製培養基時,為了使用方便和用量準確,通常採用母液法進行配製,即將所選培養基配方中各試劑的用量,擴大若干倍後再準確稱量,分別先配製成一系列的母液置於冰箱中儲存,使用時按比例吸取母液進行稀釋配製即可...
植物組織培養實驗指導
2013.3 附錄培養基母液的配製 實驗老師準備 一 實驗目的 掌握培養基母液配製的方法。二 實驗原理 配製培養基時,為了使用方便和用量準確,通常採用母液法進行配製,即將所選培養基配方中各試劑的用量,擴大若干倍後再準確稱量,分別先配製成一系列的母液置於冰箱中儲存,使用時按比例吸取母液進行稀釋配製即可...
植物組織培養實驗報告
實驗一母液的配置與儲存 一 實驗目的 通過配置ms培養基母液,掌握母液的配置和儲存方法 二 實驗原理 配置培養基時,為了使用方便和用量準確,通常採用母液法進行配置,即按培養基配方中各試劑的用量,擴大若干倍後再準確稱量分別先配製成一系列的母液置於冰箱中儲存,使用時按比例吸取母液進行稀釋配置即可。三 實...