1範圍本標準規定了化妝品微生物學細菌和黴菌總數的檢驗。本標準適用於化妝品細菌和黴菌總數的檢測。
2規範性引用檔案
gb 7916化妝品衛生標準
gb/t 7918化妝品微生物標準檢驗方法qb/t 1684-1993化妝品檢驗規則
3一般規定
細菌總數是指1g或1ml化妝品中所含的活菌數量。測定細菌總數和黴菌總數可用來判明化妝品被微生物汙染的程度，以及生產所用的原料、工具裝置、工藝流程、操作者的衛生狀況，是對化妝品進行衛生學評價的綜合依據。3.
1方法提要：
本標準採用標準平板計數法。化妝品中汙染的微生物種類不同，每種微生物都有它一定的生理物理特性，培養時對營養要求、培養溫度、培養時間、ph值、需氧性質等均有所不同。在實際工作中，不可能做到滿足所有菌種的要求，因此所測定的結果，只包括在本方法所使用的條件下（在卵磷脂、吐溫-80營養瓊脂上，於37℃培養48h；在虎紅瓊脂培養基上培養72h)生長的一群嗜中溫的需氧及兼性厭氧的微生物總數。
3.2儀器
3.2.1 250ml錐形瓶。3.2.2電子天平、量筒。3.2.3壓力蒸汽滅菌鍋。3.2.4移液管。
3.2.5滅菌培養皿：直徑9cm。3.2.6酒精燈。3.2.7恆溫培養箱。3.2.8放大鏡。3.3培養基和試劑的製備
3.3.1生理鹽水：氯化鈉8.5g
蒸餾水1000ml
溶解後，分裝到加適量玻璃珠的250ml錐形瓶內，每瓶90ml，經121℃(0.11 mpa)20min高溫高壓滅菌。
3.3.2卵磷脂、吐溫80-營養瓊脂培養基：
制法：稱取51g粉狀卵磷脂、吐溫80-營養瓊脂成品培養基加入到1000ml純水中混合,溶解均
勻後分裝,經121℃(0.11 mpa) 20min高溫高壓滅菌，儲存於冷暗處備用。
3.3.3虎紅瓊脂培養基：
制法：稱取31.6g粉狀虎紅瓊脂成品培養基加入到1000ml純水中混合,溶解均勻後分裝,經
121℃(0.11 mpa) 20min高溫高壓滅菌，儲存於冷暗處備用。
4倒培養皿操作步驟：
4.1按國家標準要求檢測細菌總數和黴菌總數.
倒培養皿前供檢樣品的採集、儲存和樣品製備按《微生物檢驗總則》要求進行操作。4.1.
1細菌總數檢測：用移液管吸取1：10稀釋的檢樣1ml，注入到乙個滅菌培養皿內；將熔化並冷至45～50℃的卵磷脂、吐溫80-營養瓊脂培養基傾注於培養皿內，每皿約15ml；隨即水平轉動培養皿，使樣品與培養基充分混合均勻，待培養基凝固後，翻轉培養皿，置37℃培養箱內培養48h。
4.1.2黴菌總數檢測：
用移液管吸取1:10稀釋的檢樣1ml，注入到乙個滅菌培養皿內；將熔化並冷至45～50℃的虎紅瓊脂培養基傾注於培養皿內，每皿約15ml；隨即水平轉動培養皿，使樣品與培養基充分混合均勻，待培養基凝固後，翻轉培養皿，置25℃培養箱內培養72h。
5菌落計數方法：
先用肉眼觀察，點數菌落數，然後再用放大5～10倍的放大鏡檢查，以防遺漏。記下各培養皿的菌落數後，求出同一稀釋度各培養皿生長的平均菌落數；若培養皿中有連成片狀的菌落或花點樣菌落蔓延生長時，該培養皿不宜計數；若片狀菌落不到培養皿中的一半，而其餘一半中菌落數分布又很均勻，則可將此半個培養皿菌落計數後乘2，以代表全皿菌落數。
6菌落計數原則及報告方法：
6.1首先選取平均菌落數在30～300之間的培養皿，作為菌落總數測定的範圍。當只有乙個稀釋
度的平均菌落數符合此範圍時，即以該培養皿菌落數乘其稀釋倍數（見表中例１）
6.2若有兩個稀釋度，其平均菌落數均在30～300個之間，則應求出兩者菌落總數之比值來決定。
若其比值小於或等於2應報告其平均數，若大於2則報告其中較小的菌落數(見表中例2例3)。6.3若所有稀釋度的平均菌落數均大於300個，則應按稀釋度最高的平均菌落數乘以稀釋倍數報
告之(見表中例4)。
6.4若所有稀釋度的平均菌落數均少於30個，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數報
告之(見表中例5)。
6.5若所有稀釋度的平均菌落數均不在30～300個之間，其中乙個稀釋度大於300個，而相鄰的
另一稀釋度小於30個時，則以接近30或300的平均菌落數乘以稀釋倍數報告之(見表中例6)。6.6若所有的稀釋度均無菌生長，報告數為每克或每毫公升小於10個。
6.7菌落計數的報告，菌落數在10以內時，按實有數值報告之，大於100時，採用二位有效數字，
在二位有效數字後面的數值，應以四捨五入法計算。為了縮短數字後面零的個數，可用10的指數來表示(見下表報告方式欄)。在報告菌落數為「不可計」時，應註明樣品的稀釋度。
細菌計數結果及報告方法：例次1234567註解：
7.1操作注意事項：
1）盡量使菌細胞分散開，使每個菌細胞生成乙個菌落，否則將會導致重大的技術誤差。2）製成供試液後，應盡快稀釋，注皿。一般稀釋後應在1小時內操作完畢。
3）注意抑菌現象，由於防腐劑未被中和，往往使平板計數結果受影響，如低稀釋時菌落少，而高釋釋度時菌落數反而增大。
4）對照試驗。化妝品的稀釋液（特別是1:1o的稀釋液）常帶有化妝品顆粒，有時與菌落很難區分，為了避免與細菌菌落發生混淆，可作乙個檢樣稀釋液與瓊脂混合的平板，不經培養放到4℃環境中，以便計數檢樣菌落時用作對照。
5）另一種防止化妝品顆粒與菌落混淆的方法是培養基中加ttc。注：ttc溶液要放冷暗處儲存，以防受熱與光照而發生分解。
ttc溶液在使用前應在水浴中煮沸半小時。
7.3菌落計數及報告注意事項
1）如果稀釋度大的平板上菌落數反比稀釋度小的平板上菌落數高，有兩種可能性：一是檢驗工作中發生差錯；二是受防腐劑影響。這二種情況均不可用作檢樣計數報告的依據。
2）如果平板上出現鏈狀菌落，菌落之間沒有明顯的界限，這是在瓊脂與檢樣混合時，乙個細胞塊被分散所造成。一條鏈作為乙個菌落計，如有**不同的幾條鏈，每條鏈應作為乙個菌落計，不要把鏈上生長的各個菌落分開來數。此外，如培養皿內瓊脂凝固後未及時進行培養而遭受昆蟲侵入，在昆蟲爬過的地方也會出現鏈狀菌落，也不應分開來數。
3）如果所有平板上都菌落密布，不要用多不可計報告，而應在稀釋最大的平板上，任意數其中兩個平方厘公尺中的菌落數，除以2求出lcm2內平均菌落數，乘以皿底面積63.6cm2，再乘以其稀釋倍數。以此結果作報告，例如：
10-1～10-3稀釋度的所有平板上均菌落密布，而在10-3稀釋度的平板上任意數兩個平方厘公尺內的菌落數是60個，皿底直徑為9cm，則該檢樣每克（或ml）
不同稀釋度的平均菌落數兩稀釋度菌落總數10-110-210-3菌數之比個/g或個/ml1365 164 202760 296 462890 271 60不可計4650 51327 11 5不可計305 12
－1.62.2---
16400380002710051300027030500
報告方式
個/g或個/ml16000或1.6×10438000或3.8×10427000或2.
7×104510000或5.1×105270或2.7×10231000或3.
1×104
中「估計」菌落數為：60÷2×63.6×1000＝1.9×106
63.6是按皿底直徑為9cm時計算而得的面積，如所用培養皿底直徑不是9cm，應另求面積。4）鑑於檢樣中的細菌是以單個、成雙、鏈狀或成堆的形式存在，因而在平板上出現的菌落可以**於細胞塊，也可**於單個細胞，故平板上所得需氧和兼性厭氧的菌落數應以單位重量（g）或容量（ml）的菌落形成單位（colony formingunits cfu）報告更恰當。
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