實驗目的和要求
1、掌握紫外可見分光光度計的基本操作；
2、掌握鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵的原理和方法；
3、掌握吸收曲線繪製及最大吸收波長選擇；
4、掌握標準曲線繪製及應用。
實驗原理
鄰二氮菲是一種有機配位劑，可與fe2+離子形成紅色配位離子：
在ph=3~9範圍內，該反應能夠迅速完成，生成的紅色配位離子在510nm波長附近有一吸收峰，摩爾吸光係數為1.1×104，反應十分靈敏，fe2+離子濃度與吸光度符合光吸收定律，適合於微量鐵的測定。
實驗中，採用ph=4.5~5的緩衝溶液保持標準系列溶液及樣品溶液中的fe3＋離子並防止測定過程中fe2+離子被空氣氧化。
實驗儀器與試劑
1、v—1100d型可見光分光光度計 2、標準鐵儲備溶液（1.00×10－3mol/l）
3、鄰二氮菲溶液（0.15%，新鮮配製） 4、鹽酸羥胺溶液（10%，新鮮配製）
5、醋酸鹽緩衝溶液6、50ml容量瓶7個
7、5ml移液管4只8、1cm玻璃比色皿2個
9、鐵樣品溶液
實驗步驟
1、標準系列溶液及樣品溶液配製
按照下表配製鐵標準系列溶液及樣品溶液
2、吸收曲線繪製
用1cm比色皿，以1號溶液作為參比溶液，測定4號溶液在下列各個波長處的吸光度；並以測定的吸光度為縱座標，波長為橫座標製圖，繪製吸收曲線，並從吸收曲線上找到最大吸收波長。
3、標準曲線繪製
在選定的最大波長處，用1cm比色皿，以1號溶液作為參比溶液，分別測定2~7號溶液的吸光度；再以吸光度為縱座標，系列標準溶液的濃度為橫座標制
圖，繪製標準曲線。
實驗資料處理
1、樣品溶液中的鐵含量計算
根據7號溶液吸光度的測定值，在標準曲線上求出其對應的濃度值c讀取值=（0.536+0.0329)÷11.
395=0.05×10-3mol/l。再採用下式計算樣品溶液中鐵的含量：
cx=c讀取值×
則cx=0.05×10-3mol/l×=1.0×10-3mol/l
2、摩爾吸收係數計算
在標準曲線的直線部分選擇兩個點，讀取對應的座標值，按照下是公式計算鐵鄰二氮菲紅色配位物在最大吸收波長處的摩爾吸收係數：
任選兩個點c1=0.04×10-3mol/l，a1 =0.4229；c2=0.08×10-3mol/l，a2=0.8787
則ε=1.1×104l/(molcm)
實驗討論
1、從測定的標準溶液的吸光度可發現6號標準溶液的吸光度按理論上稍偏小了一些，可能原因如下：誤差引起；實際配製的6號標準溶液濃度比要求配置的偏小；6號標準溶液的濃度稍大，對郎伯-比爾定律發生偏移離。
2、從繪製的標準曲線中可知r2=1.0000，表示此次實驗所得資料的線性很好，因此本次實驗非常成功。
3、本次實驗影響成敗的關鍵因素可能有：標準溶液的配製（要準確）；分光光度計使用（要正確）。
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