５６ 福建醫藥雜誌２０１５年１ｏ月第３７卷第５期
行組織病理學檢查，結果擷取兔橈骨長度３０ ｍｍ組１６週時，橈骨缺損處無骨性連線，其認為成功製備了紐西蘭大白兔保留骨膜的橈骨缺損性骨不連
口動物模型；ｂｕｌｕｔ等［１ｏ］在衝擊波**動物骨不連
時，以聚乙烯材料填充兔子橈骨骨缺損處製成骨不連模型。上述模型各有優缺點，本實驗採用擷取兔橈骨中遠端骨質，以建立一種缺損性骨不連動物模型。本實驗採用鋒利剪刀將骨質截斷，盡量使斷端
平整，模型製備過程中，盡可能保持擷取骨質部位
一致，減少長度誤差，使試驗的基本條件一致。本
實驗選取兔尺橈骨為研究部位，因其與人類前臂解
剖類似，且實驗重複性好。兔前肢的上下尺橈關節
先天性骨性融合，有學者在製作模型中不做外固定，但本實驗中發現實驗動物因本能，實驗肢體疼
痛時，會撕咬實驗肢體造成斷肢，並伴發嚴重感染
造成死亡，因此本實驗早期即術後１周予以夾板做
外固定，一方面固定保護實驗肢體，可保證動物的
自由活動，另一方面可防止兔子撕咬肢體造成模型
製作失敗。本實驗以骨蠟封閉髓腔及截骨端，可起到很好的阻滯骨的生長，並通過術後ｘ線檢查以及肢體解剖學觀察，證實了１０ ｍｍ長度骨缺損端被纖維組織填充，骨斷端髓腔封閉。實驗兔骨折癒合
５００—５０５．
時間一般為６～８周，１２週未癒合視為骨折不癒合，
本實驗觀察時間達術後１２周，１０ ｍｒｎ長度骨缺損
［９］劉昌戎，沈為棟，彭偉，等．保留骨膜的兔橈骨缺損性骨不連
動物模型的製備［ｊ］．海南醫學院學報
７２５—７２７．
未癒合，確定骨不連模型製作成功。
總之，本實驗所建立的動物模型，具有骨不連
的病理改變，符合骨不連的要求，可以認為是一種
可靠而實用的實驗性動物骨不連模型。
參考文獻
１３３—１３７．
實驗研究
丹參素對乳腺癌ｍｃｆ一７細胞株增殖影響及其分子機制
廣東省東莞市清溪鎮社群衛生服務中心（東莞５２３６６０）易長勝廖坤
余良忠王小青彭旦明
【摘要】目的研究丹參酮對乳腺癌ｍｃｆ一７細胞株增殖的影響及其作用機制。方法採用ｍｔｔ考察丹參素對
ｍｃｆ－７細胞增殖的影響；利用螢光素酶報告基因系統觀察丹參素對ｍｃｆ－７細胞ｓｔａｔ３轉錄活性的影響；採用的方法考察丹參素對ｐ－ｓｔａｔ３和ｓｔａｔ３蛋白表達的影響。結果
丹參素在濃度範圍內可以劑量依賴性地抑
制ｍｃｆ－７細胞的增殖；進一步研究發現丹參素可以抑制ｓｔａｔ３的相對啟動子活性，並抑制ｐ－ｓｔａｔ３的表達。結論丹參
１江西省中醫藥研究院
福建醫藥雜誌２０１５年ｌｏ月第３７卷第５期
５７ 素具有抗人乳腺癌ｍｃｆ－７細胞增殖的作用，機制可能與抑制ｓｔａｔ３活性有關。
【關鍵詞】丹參素；乳腺癌；細胞增殖；ｓｔａｔ３
【中圖分類號１ ｒ７３７．９【文獻標識碼】ｂ【文章編號
訊號轉導及轉錄活化因子ｓｔａｔ３與發生發展過程中的腫瘤生長、炎症、腫瘤血管生成、腫瘤轉移等多個環節緊密相關，在乳腺癌中更有持續性過度啟用［１］。有研究表明，ｓｔａｔ３持續活化是乳腺癌的重要特徵 ］。中藥丹參具有活血化瘀、清熱解毒、養血安神等功效。
多年來的報道也表明，丹參中的單體成分、丹參的提取物或丹參注射液等均具有一定的抗腫瘤作用＿３］。丹參素含有丹酚酸類化合
物的基本母核，是中藥丹參中含量最高的水溶性成
分。本研究選取ｍｃｆ－７乳腺癌細胞株，考察丹參素對ｍｃｆ一７細胞增殖抑制作用以及對ｓｔａｔ３活化的影響，以**其可能的分子機制。１材料與方法
１．１ 材料：丹參素（西安鴻生生物技術****分裝一２０００
一ｌｕｃ報告基因質粒（碧雲
天），雙螢光素酶報告基因系統試劑盒（ｑｉａｇｅｎ），
一８０５９）抗體一４８２）抗體
抗體螢光酶標儀型號為ｓｙｎｅｒｇｙ ２
（ｂｉｏｔｅｋ）；化學發光檢測儀型號為電泳裝置型號為
凝膠成像系統型號一７人乳腺癌細胞株從ａｔｃｃ細胞庫獲
得，於含１ｏ 胎牛血清以及１００ ｍｇ／ｍｌ鏈黴素和１００ ｉｕ／ｍｌ青黴素的ｒｐｍｉ１６４０培養基（ｇｉｂｃｏ）
中培養箱中進行常規培養。
１．２ 方法：
１．２．１ｍｔｔ法測定細胞增殖：ｍｃｆ一７細胞以每孔５ ０００的密度種於９６孔板中，過夜培養後，經過不同濃度的丹參素（終濃度分別為５、２５、５０
肚ｍｏｌ／ｌ）或等體積ｐｂｓ處理２４ ｈ後，每孔避光加
入５ ｍｇ／ｍｌ的ｍｔｔ ２０ ｌ，避光培養２ ｈ；棄上清，每孔加入２００ ｌ二甲亞碸（ｄｍｓｏ），作用３０
ａｒｉｎ並輕微振盪後，使結晶物充分融解，待完全溶
解後用酶標儀測定４９０ ｎｍ的吸光度。細胞增殖率（）一（實驗組ａ值一對照組ａ值）／實驗組ａ值×１００％。
１．２．２報告基因分析ｍｃｆ一７細胞中ｓｔａｔ３的相
對啟動子活性：將ｍｃｆ一７細胞使用不含雙抗的
１６４０培養基接種到２４孔板中培養，細胞生長達
８ｏ 左右融合。將３００ ｎｇ的ｐｓｔａｔ３一ｌｕｃ報告基因質粒和５ ｎｇ的螢光素酶ｒｅｎｉｌｌａ使用一２０００進行轉染，６ ｈ後更換新鮮的培養基繼續培養４８ ｈ。給予終濃度為的丹參素或等體積ｐｂｓ ６ ｈ後，每孔加入１００ ｌ的被動裂解液，取２ｏ ｌ細胞裂解產物進行螢光素酶活性檢測ｌ＿４］。
分析ｍｃｆ－７細胞中ｐ－ｓｔａｔ３和ｓｔａｔ３的表達：ｍｃｆ一７細胞經終濃度為５、２５、
５０肚ｍｏｌ／ｌ的丹參素或等體積ｐｂｓ處理２４ ｈ後提
取蛋白，進行分析。
１．３統計學分析：採用ｓｐｓｓ １７．０軟體進行統計
分析。計量資料以均數±標準差表示，組間的比較採用單因素方差分析，ｐ＜０．０５為差異有統計學
意義。２ 結果
２．１丹參素對ｍｃｆ一７細胞增殖影響：通過對
ｍｔｔ的平均吸光度值（ａ值）均一化後進行統計。
與對照組相比，丹參素給藥組ｍｃｆ一７細胞相對生長的比例均減少，５／，ｍｏｌ／ｌ處理組與對照組比較差異無統計學意義處
理組與對照組比較差異均有統計學意義（ｐ＜０．０５，
圖１）。
霞罌翟黑
丹參索（「ｔｏｏｌ；ｉ）
注：與對照組比較
圖１丹參素對ｍｃｆ－７細胞增殖影響
２．２丹參素對ｍｃｆ一７細胞ｓｔａｔ３轉錄活性影響：
通過雙螢光素酶報告系統對ｍｃｆ－７細胞中ｓｔａｔ３的相對啟動子活性進行檢測發現，與對照組相比，
５８ 福建醫藥雜誌２０１５年１０月第３７卷第５期
掣蜒需遙靛暈：∞
丹參素可以抑制ｓｔａｔ３的相對啟６４
２０用，機制可能與抑制腫瘤血管的發生和腫瘤侵入有動子活性（ｐ＜ｏ．０５，圖２）。
關，然而其確切機制不明¨３］。
ｓｔａｔ３是一類能被生長因子受體和非受體類酪氨酸激酶啟用的轉錄因子，具有訊號轉導和轉錄
啟用雙重功能，廣泛表達於不同型別的細胞和組織中。ｓｔａｔ３被啟用後可轉移至細胞核內與ｄｎａ結合而調控靶基因的表達，其調控的靶基因所編碼的蛋白與腫瘤細胞增殖、血管生成凋亡和轉移等有
關。因此ｓｔａｔ３與多種惡性腫瘤的發生發展密切
相關。此外，有研究表明，ｓｔａｔ３持續活化是乳腺癌的特徵，ｓｔａｔ３訊號途徑紊亂對乳腺細胞腫
對照５２５５０
瘤形成至關重要，因而理論上下調ｓｔａｔ３蛋白可
．丹參索（ｍｏｌ／ｌ）
能改變ｓｔａｔ３訊號傳導通路而對腫瘤起到**
注：與對照組比較，
作用 。
圖２丹參素對ｍｃｆ－７細胞ｓｔａｔ３
本研究考察了丹參素對ｍｃｆ一７細胞增殖抑制轉錄活性的影響
作用以及對ｓｔａｔ３活化的影響，結果顯示，２５、
２．３丹參素對ｍｃｆ－７細胞ｐ—ｓｔａｔ３和ｓｔａｔ３的５０ ｍｏｌ／ｌ的丹參素在體外可以顯著抑制乳腺癌細
表達的影響：給予不同濃度的丹參素處理細胞２４ ｈ胞ｍｃｆ一７的增殖，且作用呈劑量依賴性。進一步
後，發現丹參素可以下調ｐ－ｓｔａｔ３蛋白的表達，研究發現的丹參素能夠抑制
但是對ｓｔａｔ３總蛋白的表達則沒有明顯影響，提
ｓｔａｔ３的轉錄活性，同時還能抑制ｓｔａｔ３的磷酸示丹參素可以抑制ｓｔａｔ３的磷酸化啟用（圖３）。
化啟用，提示這可能是丹參素抗腫瘤作用的機制之一，
也為臨床上應用丹參素進行抗腫瘤**提供了
ｐ－ｓｔａｔ３
理論依據。
ｓｔａｒ３
參考文獻
（ａｐｄｈ０５
２５５【ｊ
丹參素／（「ｍｏｌ／ｉ）
圖３丹參素對ｍｃｆ－７細胞ｐ－ｓｔａｔ３和
ｓｔａｔ３蛋白的表達的影響
３討論乳腺癌是發生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，
９９發生在女性，男性僅佔１。全球乳腺癌的發
病率自２０世紀７０年代開始一直呈上公升趨勢，美國［４］朱智傑，劉兆國，周梁，等．隱丹參酮對人乳腺癌細胞ｍｄａ—
ｍｂ ２３１轉移的影響及其分子機制［ｊ］．中國實驗方劑學雜誌，
８名婦女中就會有１人患乳腺癌，目前乳腺癌已成
為威脅女性身心健康的常見腫瘤 ］。
中藥丹參是唇形科植物丹參的乾燥根及根莖卜３ｏ．
其味苦，性微寒，歸心、肝二經，臨床上廣泛用於
心血管系統疾病的** ］。丹參素是從中藥丹參水
溶性部位分離得到的主要活性成分，化學名稱為８一［７］熊偉，塗獻坤．丹參注射液對大鼠腦缺血再灌注肝損傷影響的
實驗研究［ｊ］．福建醫藥雜誌
（３，４－二羥基）苯基乳酸，分子式為ｃ。ｈ 。ｏ 。近［８］舒菁菁，李菲，董雅芬，等．丹參素藥理作用及機制的研究進
年來對丹參素的藥理作用研究主要集中在**其心展ｆｊ］．藥學實踐雜誌
血管活性特點及作用機制方面，但同時越來越多的
［９］張文，王雅傑．ｓｔａｔ３與乳腺癌的研究進展［刀．現代腫瘤
文獻表明，丹參素在體內外具有一定的抗腫瘤作醫學
乳腺癌術後護理
概述乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一。在我國佔各種惡性腫瘤的7 10 並呈逐漸上公升趨勢。部分大城市報告乳腺癌佔惡性腫瘤之首。確切 尚不明確，目前認為主要與以下因素有關 遺傳因素 月經 婚育 哺乳因素 內分泌激素因素 乳房良性疾病史 尚有爭論 營養過剩 肥胖 高脂肪飲食會增加乳腺癌的發病機會 環境因素...
乳腺癌的檢查方法
乳腺癌患者在發現異常現象時能及時進行適宜的檢查，可有助於乳腺癌患者早發現早 從而取得比較理想的 效果。據調查顯示，中國乳腺癌發病率年增幅速度是世界平均水平的2倍，照此推算，到2021年中國乳腺癌患者將高達250萬。其中，her2陽性患者的確診不足20 這意味著約有8成患者會錯過最佳 時機。早確診，早...
乳腺癌的治療方式
乳腺癌有哪些 方式?這是很多乳腺癌病人和家屬關心的問題，這個問題比較籠統，主要是看病理分期來做決定。一般乳腺癌的 方法和措施較多，包括手術 放療 化療 內分泌 等。目前大都採用以手術為主中藥艾舒坦原生本草植物粉為輔助 的綜合 乳腺癌根據不同的分期 方式可參照下述原則處理 第一期 保留胸大肌的簡化 術...