DNA Extract 血清血漿游離DNA抽提

吸附柱法提取血清血漿游離dna

使用前請先在緩衝液gd和漂洗液pw中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標籤。

1. 200 μl上述預處理的血清/血漿，不足200μl，可加緩衝液ga補足200 μl後進行下面的裂解步驟。

2. 加入20 μl proteinase k溶液，渦旋混勻。

3. 加入200 μl緩衝液gb，充分顛倒混勻，加入1μl carrier rna（濃度1μg/μl，為避免反覆凍融對carrier rna造成的損傷，應提前配好，分裝置於-20℃儲存備用），輕輕顛倒混勻，56℃孵育10 min，並不時搖動樣品，簡短離心以去除管蓋內壁的液滴。注意：

加入緩衝液gb後可能會產生白色沉澱，一般56℃放置時會消失，不會影響後續實驗。如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取dna量少和提取出的dna不純。

4. 加人200 μl乙醇（96-100%），如果室溫超過25℃，請將乙醇置冰上預冷，輕輕顛倒混勻樣品，室溫放置5min，簡短離心以去除管蓋內壁的液滴。

5. 將上一步所得溶液新增到乙個吸附柱cr2中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱cr2放**集管中。

6. 向吸附柱cr2中加入500 μl緩衝液gd （使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱cr2放入收集管中。

7. 向吸附柱cr2中加入600 μl 漂洗液pw（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇）， 12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱cr2放入收集管中。

8. 重複操作步驟7。

9. 將吸附柱cr2放**集管中，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱 cr2置於室溫放置2-5min，以徹底晾乾吸附材料中殘餘的漂洗液。

注：這一步的目的是將吸附柱中殘餘的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會影響後續的酶反應（酶切、pcr等）實驗

10. 將吸附柱cr2轉入乙個乾淨的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加20μl洗脫緩衝液te，室溫放置2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心 2 min，將溶液收集到離心管中。注：

最後離心管中的洗脫液，重新吸入吸附柱cr2，再次洗脫離心，可以提高得率。