RNA提取中各種試劑的作用

2022-09-11 11:33:03 字數 648 閱讀 8470

無論是人、動物、植物還是細菌組織,trizol法對少量的組織(50-100 mg)和細胞(5×106)以及大量的組織(≥1 g)和細胞(>107)均有較好的分離效果。trizol試劑操作上的簡單性允許同時處理多個的樣品。所有的操作可以在一小時內完成。

trizol抽提的總rna能夠避免dna和蛋白的汙染。故而能夠作rna 印跡分析、斑點雜交、poly(a)+ 選擇、體外翻譯、rna酶保護分析和分子轉殖。

提取時需要注意一些問題:提取時要做到超淨台內操作、操作帶一次性手套、ep管及tip頭都要用0.1%處理(0.

1%depc浸泡過夜後,高壓蒸氣滅菌)、小心、細緻、晃動及每次移液要輕。這樣做的唯一目的就是兩個,一是小心rnase的汙染降解rna;二是動作過度暴力破壞rna的完整性。

另外你提的rna做電泳的問題,一般rna電泳應該是做甲醛變性電泳,但是一般的瓊脂糖電泳也可以,需要上樣量稍微大些,並且跑電泳的時間越短越好(這樣也是為了減少外界rnase對rna的降解),跑完電泳立刻觀察,這樣也可以,但是如果樣品中的rna量很低或者說不是很高的話是檢測不到的。

因為這些試劑都會影響後續實驗,所以用酒精洗一到兩遍.一是酒精可以溶解一些沉澱中可能的有機物雜質,二是洗掉異丙醇,氯仿試劑,酒精的易揮發性在這裡的到運用,

最後的乙醇主要是洗滌異丙醇,也可以溶解一部分蛋白,痕量的乙醇很容易揮發掉。

釀酒酵母RNA的提取

1.準備好手套,口罩,帽子,實驗過程中經常更換手套。2.使用過的槍頭和離心管要及時更換,避免交叉汙染。3.所用的玻璃器皿 研缽 使用之前在150 的烘箱幹烘4個小時。4.操作動作要迅速。1.取處於生長期中期的新鮮菌液 接種量6 培養8小時 或4 儲存的菌液一毫公升,在離心機中短暫離心。2.去除上清液...

酵母RNA的提取和鑑定

一.實驗原理 酵母核酸中rna含量較多,dna則少於 rna可溶於鹼性溶液,當鹼被中和後,可加乙醇使其沉澱,由此即可得到 製品。二.試劑 1.幹酵母粉。2.2g l氫氧化鈉溶液。3.乙酸。4.95 乙醇。5.5 磷酸。6.濃氨水。7.3,5 羥甲苯試劑 取比重1.19hcll00m1,加入fecl3...

酵母RNA的提取和組分鑑定

試管a 出現白色渾濁現象。有嘌呤鹼存在。試管b 加熱後,出現鮮綠色,且隨著加熱時間延長,顏色越來越深。有核醣存在。試管c 加熱後,出現藍色,且隨著加熱時間延長,顏色越來越深。有磷酸存在。說明rna的組分中有嘌呤鹼 核醣 磷酸。分析 本實驗選用酵母,是因為酵母中rna含量較多,且 便宜。rna可溶於鹼...