目錄1、前言3
2、實驗目的3
3、實驗原理3
4、實驗裝置4
5、實驗材料及試劑4
6、實驗操作步驟5
7、結果及計算（附圖表8
8、注意事項10
9、費用預算10
10、實驗可行性分析和評估11
11、指導老師11
12、參考文獻11
摘要 目前可用濃茶汁消炎殺菌，但濃茶消炎會造成物質浪費，使用不便。本實驗擬提取綠茶中的主要消炎成分，進行定性、定量分析並將其主要消炎成分製成軟膏，以大鼠踝關節炎症模型比較不同濃度茶多酚軟膏之間的療效和茶多酚軟膏與丁苯羥酸乳膏的療效。
關鍵詞茶葉消炎茶多酚茶多酚軟膏
1 前言
茶葉中富含茶多酚、氨基酸、維生素及多種礦物質等。茶葉具有清暑、解毒、治痢、祛痰、明目等廣為人知的二十三功效，被世人譽為「萬病之藥」。
濃茶汁具有消炎殺菌的作用，與水混合後煎沸成濃汁。每日一劑，日2次，在患處用濃汁外敷，可以起到很好的消炎作用。但是濃茶汁在使用上存在一定的弊端，如濃茶汁需每日煎熬2次，塗抹不宜等，給病人的使用帶來了很大的不便。
因此需要尋找一種更好的利用茶葉消炎的替代方法。
本實驗擬提取茶葉中消炎的有效成分，並將主要消炎成分以不同配比製成軟膏，以大鼠踝關節炎症模型比較不同濃度茶多酚軟膏之間治炎的療效和茶多酚軟膏與丁苯羥酸乳膏治炎的療效。
2 實驗目的
提取茶葉中的茶多酚並製成軟膏，**其抗炎藥效，並比較丁苯羥酸乳膏的抗炎效果。
3 實驗原理
3.1 提取
茶多酚是茶葉中的多酚類物質，主要成分為兒茶素、黃酮等，利用這些成分易溶於乙醇的特點，用乙醇浸提茶葉，得到茶多酚粗提取液。利用茶多酚跟鋇、鋁、鈣等離子生成絡合沉澱的特點，使其從提液中分離出來 ，從而與水溶液中咖啡鹼 、單醣 、氨基酸等組分分離，再用鹽酸溶解，並用乙酸乙酯萃取，即得到純度較高茶多酚溶液。
3.2 鑑定
兒茶素為茶多酚的主要成分，約佔總量的60%～80%，因此可以通過兒茶素和香夾蘭素在強酸條件下生成桔紅色到紫紅色產物的特定顯色反應，鑑定提取液中含茶多酚。
3.3 含量測定
茶多酚能和亞鐵離子產生絡合反應的酚性化合物，為藍色絡合物，該絡合物的吸光度與其濃度成正相關，因此可以用分光光度法測定其含量，最後通過公式換算得出茶多酚濃縮液的茶多酚濃度。
3.4 **抗炎藥效
設定不同濃度的茶多酚軟膏，通過空白組和丁苯羥酸乳膏、濃度梯度相互對照，**茶多酚的抗炎藥效。炎症動物模型採用新鮮雞蛋清致大鼠足趾腫脹模型。利用毛細管放大原理，將大鼠足趾容積的變化，轉換為排水量變化，最後通過毛細管得高度刻度反映出來。
4 實驗裝置
電熱套、托盤天平、電子分析天平、燒杯、鐵架臺、三角瓶、10ml量筒、溫度計、分液漏斗、布氏漏斗、迴圈水幫浦、濾紙、螺旋夾、單孔塞套管、毛細管、y型管、蒸餾頭、直形冷凝管、真空接引管、漏斗、玻璃導管、（100ml、25ml）容量瓶、移液管、分光光度計（uv-1100，上海美譜達/上海）、洗耳球、玻璃棒、蒸發皿、紗布、棉棒、注射器、刻度吸管、玻璃管（內徑2cm、長8cm）、記號筆、橡皮管、三通活塞、計時器、試管
5 實驗材料及試劑
5.1 實驗材料：大鼠、茶葉、丁苯羥酸乳膏
5.2 試劑及其配製： 水、無水氯化鋁、nahco3、60%乙醇溶液，乙酸乙酯、硫酸亞鐵、氯化鋅、香夾蘭素、濃鹽酸、酒石酸鈉鉀、磷酸二氫鈉、磷酸二氫鉀、 酒石酸亞鐵溶液、2.
1ml新鮮雞蛋清、10g凡士林，20g羊毛脂
5.3 溶液的配製：
5.3.1 凡士林-羊毛脂溶液：稱取10g凡士林，20g羊毛脂，放入盛有40ml水和20ml 90%乙醇中，並使其充分溶解後備用。
5.3.2 酒石酸亞鐵溶液：
秤取0.1g（準確至0.0001）硫酸亞鐵feso3·7h2o，0.
5g酒石酸鈉鉀knac14h4o6·4h2o（準確至0.0001）,用水溶解並定容至100ml。
5.3.3 ph7.5磷酸鹽緩衝液：
5.3.3.
1 1/15mol/l磷酸二氫鈉：1/15mol/l磷酸二氫鈉：稱取2.
39g 十二水磷酸氫二鈉（na2hpo4·12h2o），加水溶解後定容至100ml。
5.3.3.2 1/15mol/l磷酸二氫鉀：稱取經0.908g110℃烘乾的磷酸二氫鉀（kh2po4），加水溶解後定容至100ml。
5.3.3.3 取上述1/15mol/l的磷酸氫二鈉85ml和1/15mol/l的磷酸二氫鉀15ml混合均勻。
5.3.4 1%香夾蘭素鹽酸溶液：0.1g香夾蘭素溶於10ml濃鹽酸中，配好的溶液呈淡黃色，若發現變紅或變藍綠者俊不宜採用。
6 實驗操作步驟
6.1 茶多酚的提取
6.1.1 取茶葉25g，置於2000ml平底燒瓶中，加入60%乙醇，1g茶葉加入25ml乙醇，加熱至70℃，浸提20分鐘。去除茶渣。浸提兩次。
6.1.2 加入氯化鋁和氯化鋅(按照1:2比例)，沉澱劑質量：茶葉質量=3:20，加入nahco3,ph調節至6，得到沉澱物，過濾取濾渣，加入稀鹽酸至沉澱完全溶解。
6.1.3 萃取：
用乙酸乙酯萃取3次，體積比1:1。
6.1.4 蒸發濃縮：
採用減壓蒸發，裝置如圖1.在蒸餾燒瓶中加入萃取所得的液體，然後連線真空介面和減壓器，使系統處於減壓狀態。開啟水浴鍋加熱蒸餾燒瓶。濃縮至可見晶體析出時，停止加熱。
6.1.5 用量筒測定濃縮液的體積
圖16.2 茶多酚的鑑定
取10ml香夾蘭素鹽酸濃縮液，加入內盛1ml95%乙醇的試管中，然後加入5ml1%香夾蘭素鹽酸溶液，加塞後振盪搖勻，觀察其顏色變化。
6.3 定量
6.3.1 稀釋濃縮液：
用20ml移液管精確量取20ml濃縮液至100ml定量瓶中，加入蒸餾水，稀釋定容至100ml，充分振盪混勻。
6.3.2 配製測量液
在25ml容量瓶中用定量加樣器加入5ml稀釋液（3.4.1），再加入5ml酒石酸亞鐵（3.1.1）,充分混合，再加入緩衝液至刻度，搖勻。
配製空白液：在25ml容量瓶中加入5ml蒸餾水、5ml酒石酸亞鐵，用磷酸緩衝液定容至刻度。
6.3.3 測量吸光度：
用10mm比色杯，波長540nm處，以試劑空白液作為參比，測定吸光度。然後用下式計算出濃縮液濃度。
3.913--當吸光度為1.0時，每毫公升溶液中茶多酚的量
a—測得的吸光度，測得濃縮液中茶多酚的濃度為c1
6.3.3 配置25ml茶多酚-乙醇溶液
6.6.3.1 計算濃縮物的物質的量n
用量筒測量茶多酚濃縮物的體積v1，根據n=c1*v1計算出濃縮物中茶多酚的物質的量
6.3.3.2 茶多酚-乙醇溶液配置及濃度計算
將茶多酚濃縮物和90%乙醇溶液混合，在25ml容量瓶中配置成25ml茶多酚乙醇溶液。根據c1= n/25計算出茶多酚-乙醇溶液的濃度c2，然後再計算出各軟膏中茶多酚的濃度。
6.4 製備茶多酚軟膏
按下錶分別取茶多酚溶液、凡士林-羊毛脂溶液若干，混合攪勻，靜置一段時間後成為膏狀物，製備不同配比的茶多酚軟膏。
茶多酚軟膏主要成分的配比
7號軟膏——丁苯羥酸乳膏
6.5 各組茶多酚軟膏及市售消炎藥的消炎作用比較
6.5.1 建立小鼠**炎症模型：
取體重相近且同性別的大鼠11只，編號1——11，稱重。以排水法分別測量11只大鼠左後腳及右後腳的正常容積值（以毫公升表示），測量2次，取其平均值作為致炎前自身對照。
按下錶在各大鼠左、右後足均勻塗抹所對應藥膏3ml，並用紗膠布固定1h後去掉藥膏。然後在大鼠左、右後腳掌腱膜下向踝關節周圍注射新鮮雞蛋清0.1ml使其致炎。
致炎後每隔1h測量各只小鼠左、右後腳的容積，連續3次。以左、右後腳給致炎劑前後容積之差，作為踝關節腫脹程度。
6.5.2 容積測定及各組藥膏消炎作用比較
排水法測量裝置如圖2所示
圖26.5.2.
1 三路活塞，一端與5ml注射器相通，一端與倒置的刻度吸管想通，中間與一玻璃管相連，玻璃管內徑2cm，長8cm，其內盛滿水銀（或水）。轉動三路活塞d使a與b相通，將水推到吸管的「0」點，接著關閉b使a與c相通。
6.5.2.2 將注射器內的水推完，用吸管調節玻璃管內水量，使刻度吸管內液面與玻璃管上刻度平齊，並在玻璃管水面做以標記。
6.5.2.
3 為使每次測量位置相同，可先用記號筆或黑漆在實驗大鼠左、右後腳劃一標記，然後將此腳置入玻璃管內，玻璃管內水面上公升，抽動注射器針芯使足標記與玻璃管上的標記相平行。待玻璃管內液面與其標記相平時，立即關閉c使a與b相通，隨即取出大鼠後腳。
6.5.2.4 將注射器內液體全部推入吸管內，記錄水柱高度。此時吸管內顯示的水柱高度即為大鼠後腳的容積。
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