紫外 可見分光光度法標準操作程式

2022-07-24 08:51:02 字數 2066 閱讀 7231

1.目的:建立紫外分光光度法標準操作程式,使紫外分光光度法操作規範化、標準化。

2.範圍:適用於紫外分光光度法的檢查或含量測定。

3.職責:質量管理部qc負責本規程的實施;質量管理部負責人負責本規程實施情況的監督。

4.規程

4.1原理:通過測定被測物質在特定波長處或一定波長範圍內的光吸收度,對該物質進行鑑別檢查或含量測定。

4.2儀器和裝置:uv-1800型紫外可見分光光度計、乾燥箱、電子天平(感量0.0001g)。

4.3 試液與試劑:基準重鉻酸鉀、0.005mol/l硫酸溶液。

4.4 儀器的校正和檢定:

4.4.1由於溫度的變化對機械部分的影響,儀器的波長經常會略有變動,因此除應定期對所用的儀器進行全面校正檢定外,還應於測定前校正測定波長。常用汞燈中的較強譜線237.83nm,253.

65nm,275.28nm,296.73nm,313.

16nm,334.15nm,

4.4.2 365.02nm,404.66nm,435.

83 nm,546.07 nm,與576.96nm或用儀器中的氘燈的486.

02 nm與656.10nm譜線進行校正,鈥玻璃在279.4nm,287.

5nm333.7nm,306.9nm,418.

5nm,460.0nm,484.5nm,536.

2nm與637.5nm波長處有尖銳吸收峰,也可作波長校正用,但因**不同會有微小的差,別,使用時應注意。

4.4.3吸收度的準確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。取在120℃乾燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg,精密稱定,用0.005mol/l硫酸溶液溶解至1000ml,在規定的波長處測定並計算其吸收係數,並與規定的吸收係數比較,如下表,相對偏差應在±1%以內。

雜散光的檢查可按下表的試劑和濃度,配製成水溶液,置1cm石英吸收池中,在規定的波長處測定透光率。

4.5對溶劑的要求:測定供試品前,應先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求,吸收盛溶劑,以空氣為空白(即空白光路中不置任何物質)測定吸收度。溶劑和吸收度池的吸收度,在220~240 nm範圍內不得超過0.

40,在241~250 nm範圍內不得超過0.20,在251~300 nm範圍內不得超過0.10,在300 nm以上不得超過0.

05。4.6操作方法

4.6.1測定時,除另有規定外,應以配製供試品溶液的同批溶劑為空白對照,採用1㎝的石英吸收池,在規定的吸收峰波長±2nm以內測試幾個點的吸收度,以核對供試品的吸收峰波長位置是否正確,除另有規定外,吸收峰波長應在該品種項下規定的波長±2nm以內;否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長的準確度,並以吸收度最大的波作為測定波長。一般供試品溶液的吸收度讀數,以在0.3~0.

7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應小於供試品的吸收帶半寬度,否則測得的吸收度會偏低;狹縫寬度的選擇,應以減小狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準,由於吸收池和溶劑本身可能有空白吸收,因此測定供試品的吸收度後應減去空白讀數,再計算含量。

4.6.2用作鑑別和檢查專案的方法,分別按各品種項下的方法進行。鑑別項下吸收度讀數的範圍可根據製劑的實際含量和供試液的稀釋倍數估算。

4.6.3用於含量測定的方法一般有以下幾種。

4.6.3.1對照品比較法按各種項下的方法,分別配製供試品溶液和對照品溶液,對照品溶液中所含被測成分的量應為供試品溶液中被測成分標示量的100%±10%,所用溶劑也應完全一致,在規定的波長測定供試品溶液和對照品溶液的吸收度後,按下式計算供試品中被測溶液的濃度:

cx=(ax/ar)cr

式中 cx為供試品溶液的濃度;

ax 為供試品溶液的吸收度;

ar為對照品溶液的吸收度;

cr為對照品溶液的濃度

4.6.3.2吸收係數法按各品種項下的方法配製供試品溶液,在規定的波長處測定其吸收度,再以該品種在規定條件下的吸收係數計算含量。用本法測定時,應注意儀器的校正和檢定。

4.6.3.3計算分光光度法採用計算分光光度法應慎重。本法有多種,使用時均應按各品種項規定的方法進行。當吸收度處在吸收曲線的陡然上公升或下降的部位測定時,波長的微小變化可能對測定結果造成顯著影響,故對照品和供試品測試條件應盡可能一致。

若測定時不用對照品,則應在測定時對儀器作仔細的校正和檢定。

5.標準依據:《中國獸藥典》2023年版。

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