一、 實驗內容：
將昆蟲總蛋白通過勻漿的方法溶解於磷酸氫二鈉/磷酸二氫鈉緩衝液中，離心取上清液作為蛋白質粗提液，用考馬斯亮藍g-250法測定蛋白質濃度；將粗提液通過硫酸銨鹽析進行分離（15%、30%『45%飽和度的硫酸銨分別沉澱），得到不同的組分，測定不同組分的蛋白質濃度；將蛋白粗提液和收集到的各組分進行sds-page分析，比較粗提液和各組分中蛋白質的成分，分析分離效果。
二、 實驗過程：
1、 蛋白質粗提液製備
溶液配製：0.1mol/l ph7.4磷酸緩衝液
（1）1000ml 0.1mol/l磷酸氫二鈉：？g磷酸氫二鈉溶於800ml蒸餾水中，定容至1l；
（2）250ml 0.1mol/l磷酸二氫鈉： ？g磷酸二氫鈉溶於200ml蒸餾水中，定容至250ml；
890ml（1）+190ml（2）混合即得0.1mol/l ph7.4磷酸緩衝液。
樣品製備：取50頭玉公尺象，用少許緩衝液洗去表面麵粉，勻漿於1ml 0.1mol/l ph7.
4磷酸緩衝液中，14000r/min離心15min，將上清轉移至一新的離心管中作為蛋白質粗提液備用。
2、 蛋白質濃度測定：
（1）溶液配製：
1mg/ml牛血清白蛋白（bsa）標準溶液，5mg牛血清白蛋白溶於5ml水中；
考馬斯亮藍g-250蛋白試劑, 稱取100mg考馬斯亮藍g250溶於50ml90%的乙醇溶液中，加入85%的磷酸100ml，最後用蒸餾水定容到1000ml，濾紙過濾，避光儲存。
（2）0～100g/ml標準曲線測定：
取6支試管，按下錶配製蛋白質濃度梯度各2ml
測定各個濃度的標準溶液595nm吸光值（od595）：500l蛋白溶液與2.5ml考馬斯亮藍g250溶液混勻，用分光光度計測定od595，每個溶液3次重複測定。
以od595值（3次重複的平均值）為x，蛋白濃度為y做直線，得出標準曲線y=ax+b，r=?。
（3）測定粗提液蛋白濃度，將粗提液用蒸餾水稀釋100倍（2ml），取稀釋液500l與2.5ml考馬斯亮藍g250溶液混勻，用分光光度計測定od595，以500l蒸餾水+2.5ml考馬斯亮藍g250溶液混勻作為空白對照，3次重複測定，用平均值計算其濃度。
3、 硫酸銨鹽析的方法進行分離
4、 sds-page
溶液配製：
100ml 30%凝膠儲液（arc/bis）：29.2g丙烯醯胺和0.8g甲叉雙丙烯醯胺溶於80ml蒸餾水中，定容至100ml，避光儲存。（該溶液有神經毒性，避免接觸**）；
100ml 1.5m tris-hcl,ph8.8：18.15gtris 鹼溶於60ml蒸餾水中，用hcl調ph值至8.8，定容至100ml蒸餾水中；
100ml 0.5m tris-hcl,ph6.8：6gtris 鹼溶於60ml蒸餾水中，用hcl調ph值至6.8，定容至100ml蒸餾水中；
10ml上樣緩衝液：0.5ml ddh2o + 2.
5ml of 0.5m tris-hcl, ph6.8 + 2ml 甘油 + 4ml 10% sds+77.
1mg dtt+1ml 0.05（w/v）溴酚藍；
600ml 5×電泳緩衝液：9g tris鹼+43.2g甘氨酸+3gsds蒸餾水溶解定容至600ml；
1ml 10%過硫酸銨溶液（現用現配）：0.1g過硫酸銨溶於1ml蒸餾水中。
1000ml固定液：取908ml50%的甲醇和92ml冰乙酸混勻；
500ml染色液：0.25g考馬斯亮藍r250，加500ml固定液溶解，過濾後避光儲存；
1000ml脫色液：取75ml冰乙酸和50ml甲醇，加蒸餾水定容至1000ml。
凝膠製備：
7.5%分離膠（20ml）
ddh2o11.87ml
30% arc/bis5ml
1.5mph8.8tris-hcl 2.5ml
10%sds0.2ml
10%的ap0.1ml
temed10l
4%濃縮膠（10ml）
ddh2o6ml
30% arc/bis1.3ml
0.5mph6.8tris-hcl 2.5ml
10%sds0.1ml
10%的ap0.05ml
temed5l
灌膠：將電泳板組裝好，先灌分離膠至2/3處，水封，分離膠凝固後，吸去水，灌入濃縮膠至滿，插入梳子，注意不要產生氣泡，待膠凝固後，拔去梳子。
樣品準備：
分子量marker、100g粗提液、100g分離組分與樣品緩衝液混合，煮沸3min，作為電泳樣品上樣。
電泳裝置安裝：安好後在正負極分別加入稀釋好的電極緩衝液。
上樣：將處理好的樣品分別加入樣品孔中，記好加樣順序。
電泳：接好電泳儀，通電，先恆壓80v電泳，溴酚藍前沿到達分離膠介面時，加大電壓至120v繼續電泳，直到溴酚藍前沿到達凝膠底部，結束電泳。
剝膠：拆開電泳裝置，取出玻璃板，看清點樣方向，從玻璃板的一角撬起，凝膠留在長板上，在右下角切角作標記，用固定液沖下凝膠。
固定：將凝膠放在大培養皿中，用固定液固定1h；
染色：倒去固定液，加入染色液，染色1h，
脫色：倒去染色液，加入脫色液進行脫色，直至看清條帶。
凝膠拍照。
三、實驗結果
1、 各組分蛋白濃度
2、 電泳結果
四、 分析討論
分離效果如何？實驗設計如何改進？
蛋白質纖維染色實驗
阿白哥set owf1 80 醋酸 owf1.5 醋酸鈉 g l1 硫酸鈉 owf5 醋酸調節ph值 4.5 5 浴比1 50酸化 85 甲酸 owf1 2 50 5min 浴比1 50 10060 90 60 40取出 加助劑材料染料 調ph值 3 毛用活性染料染色 流程 配製染液 纖維潤濕 擠乾...
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目錄摘要11 引文2 2蛋白質藥物口服吸收的機制及途徑2 2.1 載體轉運2 2.2 胞飲作用和m 細胞途徑2 3蛋白質藥物吸收的主要屏障3 3.1酸屏障3 3.2酶屏障3 3.3膜屏障3 4保護口服蛋白質藥物活性的方法4 參考文獻5 摘要 由於蛋白質藥物的無損傷性傳輸系統以及作用位點專一等特點，已...