測定食品中的蛋白質凱氏定氮
2013.3.25
組員：***
實驗目的：（1）會測定食品中粗蛋白的含量。
（2）明確常見的食品蛋白質含量，以及測定原理。
實驗原理：將被檢樣品加入濃硫酸，以硫酸銅，硫酸鉀為催化劑共同加熱消化食品中蛋白質分解為氨，並與硫酸結合成硫酸銨，通過鹼化蒸餾，使氨分離出來，用硼酸吸收形成硼酸按後，再用鹽酸標準溶液滴定，根據消耗的標準鹽酸的體積，通過換算係數，可測定食品中蛋白質的含量。
實驗儀器：凱氏燒瓶、可調式電爐、定氮蒸餾裝置
試劑：①硫酸銅cuso4.5h2o ②硫酸鉀 ③硫酸（密度為1.
8149g/l） ④40g/l硼酸溶液 ⑤混合試劑；1g/l甲基紅乙醇溶液與1g/l亞甲基藍乙醇溶液，用時按2：1的比例混合。
實驗步驟:
資料處理：標定0.1000mol/l鹽酸標準溶液
微量蒸餾按下式計算：
x=f式中 x 食品中蛋白質質量分數，%;
v滴定試樣時消耗鹽酸標準滴定溶液的體積，ml;
v0 空白試驗時消耗鹽酸標準滴定溶液的體積ml；
c 鹽酸標準滴定溶液的濃度；
0.014 氮的毫摩爾質量，g/mmol;
m 試樣的質量，g;
f 氮換算蛋白質的係數。
注意事項：①本實驗對蛋白質含量進行測定，因樣品中常含有核酸、生物鹼、含氮類脂以及含氮色素等非蛋白質的含氮化合物，故結果稱為粗蛋白質含量。
②為減少實驗誤差，所有試劑溶液應用無氨蒸餾水配置。
③消化過程要不斷轉動凱氏燒瓶，以利於附著在燒瓶上的固體殘渣被洗下，促進其消化；同時為防止造成氮損失，不要用強火，應保持緩和沸騰。
④樣品中含脂肪或糖較多，消化過程中易產生大量泡沫，為防止泡沫外溢，在消化開始時用小火加熱，並時時搖動，並可以加入少量辛醇、液體石蠟或矽油消泡劑，並控制熱源強度。
⑤一般消化至呈透明後，繼續消化30min即可，但對於含有特別難以氨化的氮化合物的樣品，如含賴氨酸、組氨酸、色氨酸、酪氨酸或脯氨酸等時，呈較深綠色。
⑥當樣品消化液不易呈透明時，可將凱氏燒瓶冷卻，加入30%過氧化氫2-3ml後繼續加熱消化。
⑦蒸餾裝置應密封，防止漏氣；蒸餾過程中不得停火斷氣，防止放生倒吸，消化液呈藍色不生成氫氧化銅沉澱，說明蒸餾前加鹼量不足，要再增加氫氧化鈉用量；蒸餾完畢後，應先將冷凝管下端提高液面，清洗管口，再蒸餾1min，而後關掉熱源，否則可能造成吸收液倒吸。
⑧硼酸吸收液的溫度不應超過40°c，否則對氨的吸收作用減弱而造成損失，此時可置於冷水浴中。
⑨混合指試劑在鹼性溶液中呈綠色，在中溶液中呈灰色，在酸性溶液中呈紅色。
實驗體會：這次實驗做得時間比較長，中間做消化的過程的時候第一天沒有成功，當時感覺實驗成功的希望不大，還好第二天有成功。
還有就是學會了凱式定氮儀的使用。
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