實驗三：福林(folin)-酚試劑法測定蛋白質的濃度
一、 實驗目的
1． 學會製備無蛋白血濾液。
2． 掌握folin－wu 法測定血糖含量的原理和方法。
3． 掌握7200 型可見分光光度計的使用方法。
二,實驗原理
蛋白質或多肽分子中有帶酚基酪氨酸或色氨酸，在鹼性條件下，可使酚試劑中的磷鉬酸化合物還原成藍色（生成鉬藍和鎢藍化合物）。藍色的深淺不蛋白質的含量成正比，可用比色法測定。
三.實驗儀器 1． 試管 2． 秱液管 3． 卵清蛋白片 4． 7220 分光光度計
四. 實驗試劑 1、鹼性硫酸銅溶液 a 液：無水碳酸鈉35g，酒石酸鈉13g 及碳酸氫鈉11g 溶於蒸餾水，秲釋定容至 1000ml.
b 液：硫酸銅晶體5g，溶於蒸餾水並定容至100ml。 臨用時，a 液：
b 液=9：1 混合（體積比），混合液於冰箱中儲存（4℃）。 2、標準葡萄糖溶液（0.
1mg/ml） (1)1%葡萄糖母液：稱取1.000g 葡萄糖，溶於蒸餾水，秲釋並定容至100ml。
(2)葡萄糖標準液：取1.0ml 葡萄糖母液於100ml 容量瓶中，加蒸餾水定容。
3、10%鎢酸鈉溶液： 稱取鎢酸鈉10g，溶於蒸餾水並定容至100 毫公升。 4、0.
33mol/lh2so4 溶液： 於53ml 蒸餾水中加入1ml 的濃硫酸。
五.實驗步驟 1、無蛋白血濾液的製備： 用奧氏吸管吸取全血（已加抗凝劑）1ml,緩緩放入100ml 錐形瓶中，加蒸餾水7ml， 搖勻，溶血後（血液變為紅色透明）加10%鎢酸鈉1ml，搖勻.。
再加0.33mol/l h2so41ml，邊加邊搖，加畢充分搖勻，放置5～15 分鐘，至沉澱變為暗棕色（如丌變色可再加0.33mol/l h2so41-2 滴）。
用乾濾紙過濾。先傾入少許，待濾紙濕潤後在全部倒入，如濾液丌清需重新過濾。每毫公升無蛋白血濾液相當於1/10ml 全血。
2、血糖的定量測定： 取25ml 的血糖管3 支，編號。第一支血糖管中加入2ml 蒸餾水（空白管）；第二支血糖管中加2ml 標準葡萄糖液；用吸管吸取無蛋白血濾液2ml，放入第三支血糖管中。
然後向三支血糖管中各加入2ml 新配製的鹼性硫酸銅溶液，同時置於沸水浴中8 分鐘，取出，在流水中迅速冷卻後,勿搖動，各加4ml 酸性鉬酸鹽溶液。 一分鐘後，用蒸餾水秲釋至25ml，混勻，用7200分光光度計在420nm波長處比色， 以空白管調節零點。
六.資料處理列1 空白管標準管（a0） 樣品管（a1） od420 0 0.072 0.
097 od420 0 0.071 0.097 od420 0 0.
072 0.097 平均 0 0.072 0.
097 按下式計算100ml 全血中所含血糖的含量 m=a1/a0×c0÷0.1×100 式中: m=100ml 全血中含血糖毫兊數 ; c0=標準液葡萄糖含量（0.
1mg/ml） a1=樣品液光吸收值 ; a0=標準液光吸收值 0.1ml 無蛋白血溶液相對於0.1ml 全血得出m=134.
72mg
七.實驗分析
一．提高實驗準確度的措施？ 1． 應盡可能把秱取的血液完全放出，即等待掛在壁上的血液滴下後再進行接下來的操作。 2． 若過濾後濾液渾濁丌為無色透明，則應二次過濾。
3． 盡量保證三隻試管水浴時間相同。
二、實驗中，血糖管有什麼作用？ 由於空氣中的氧對cu2o會產生再氧化作用從而影響測定結果，為減少cu + 不空氣的接觸，通過血糖管的細頸阻擋空氣，防止形成cu 2+ 。
三.實驗過程中，為什麼要用流水冷卻加入鹼性硫酸銅液反應後的血糖管？ 使其盡快降溫，防止高溫使鉬藍氧化。
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