ClinMACS進行CD34 細胞分選流程和效果登記

2022-07-06 01:18:04 字數 1367 閱讀 7169

患者姓名性別: 年齡病歷號:

診斷體重: 操作日期:

以下操作應在嚴格無菌操作台進行

ⅰ將人血白蛋白(hsa)注入緩衝液中(1000ml緩衝液中加入hsa 5g):使白蛋白濃度調整到0.5%

ⅱ將初次白細胞採集物轉移到細胞準備袋中(八爪袋。轉移前先稱量八爪袋重量)

1、稱量八爪袋重量(全部重量g(a2)

2、將初次白細胞採集物轉移至八爪袋中。

3、稱量含有白細胞採集物的細胞準備袋重量(八爪袋全部爪子一起稱量g(a3)

4、計算白細胞採集物重量a4=a3-a2g(a4)(不能超過200g)

注意:若超過200g則應離心去漿並將體積調整到200g以下)

(白細胞採集物的儲存條件:靜置於19-25℃,濃度<2×108/ml,濃度過高則應加入自體血漿稀釋,即細胞總量<4×1010,<24小時。若置於4℃冰箱儲存,次日則應盡早將採集物

從冰箱內取出,放在室溫,使細胞溫度自然恢復到22℃)

ⅲ稀釋白細胞採集物

在進行磁性標記之前要使用含0.5%hsa的clinimacs pbs/edta緩衝液稀釋白細胞採集物。

加入clinimacs pbs/edta緩衝液量a5=a4×2g(a5)

實際加入緩衝液量g(a6)

加入稀釋緩衝液後細胞準備袋總重量g(a7)

加入稀釋緩衝液後白細胞採集物總重量a8=a7-a2g(a8)

ⅳ將白細胞採集物重量調整到95g

能夠進行cd34+細胞磁性標記的白細胞採集物重量由試劑量決定。1支試劑能夠標記6×1010單個和細胞中的6×108個cd34+細胞換算成白細胞採集物重量為95g

離心條件:時間:15分鐘;轉速1010rpm;離心力300g(a9)

理論移除上清液量a10=a8-95gg(a10)

實際移除上清液量g(a11)

體積調整後細胞準備袋總重量g(a12)

體積調整後白細胞採集物總重量a13=a12-a2g(a13)

ⅴ進行cd34+細胞磁性標記

用18-20號針頭,10ml注射器抽取全部7.5ml試劑,經取樣聯結器口將試劑注入八爪袋中;置於搖床上,並立即計時。總標記時間為30min.

ⅵ孵育(白細胞採集物與cd34試劑共同孵育30分鐘):應使用搖床速度25rpm,19-25℃,30min(若無搖床可手搖30分鐘)

孵育開始時間b3)

是否注入空氣: 否

孵育停止時間b4)

ⅶ洗滌(1)第一次洗滌:加入細胞準備袋的緩衝液量(應為500ml) g(b5)

離心條件:時間15min 轉速:1010rpm 離心力:400g(b6)

去除上清液量g(b7)

(2)第二次洗滌:加入細胞準備袋的緩衝液量(500mlg(b8)

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